專利名稱：一種靶向于mir-150的抗白血病小分子化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物設(shè)計(jì)方面。
背景技術(shù)：
MicroRNA (微小RNA)是一種長(zhǎng)度為19 25核苷酸單鏈的內(nèi)源性非編碼性小RNA。 它主要通過(guò)與靶標(biāo)基因3'非翻譯區(qū)的完全或不完全配對(duì)，抑制其翻譯，從而參與調(diào)控個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞凋亡、增殖及分化等生命活動(dòng)。在病理?xiàng)l件下，microRNA可通過(guò)調(diào)控其靶標(biāo)基因及其參與的信號(hào)通路，影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，發(fā)揮著類似于癌基因或抑癌基因的功能。實(shí)驗(yàn)表明在很多腫瘤中，一些類型的microRNA是高表達(dá)的，這些高表達(dá)的microRNA與腫瘤的侵入性、轉(zhuǎn)移性等有一定的相關(guān)性。這些microRNA為腫瘤診斷和治療提供了新的策略。目前抑制microRNA功能的普遍方法是采用反義抑制的原理。實(shí)驗(yàn)證明，與成熟體microRNA完全互補(bǔ)或與前體microRNA—些區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)過(guò)修飾的RNA可以有效的抑制 microRNA功能。一些體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，這種抑制RNA通過(guò)體內(nèi)注射也有效果。因此具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。然而，反義抑制方法存在體內(nèi)給藥困難的問(wèn)題。目前的各種向體內(nèi)運(yùn)送RNA方法， 包括化學(xué)轉(zhuǎn)染試劑以及病毒載體等，都存在效率和安全性問(wèn)題，因此一直無(wú)法達(dá)到臨床應(yīng)用的要求。而傳統(tǒng)的小分子化合物藥物則在給藥方面存在明顯的優(yōu)勢(shì)，或注射或口服，簡(jiǎn)單有效。因此我們認(rèn)為小分子化合物抑制劑將比傳統(tǒng)的反義抑制RNA更有潛力成為靶向 microRNA的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡活性的化合物。本發(fā)明的第一方面，提供了一種2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的用途，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、和/或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的化合物。在另一優(yōu)選例中，所述的致凋亡化療藥物包括腫瘤壞死因子，更佳地為人TNFa。在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤或腫瘤細(xì)胞是表達(dá)名為mir-150的microRNA的腫瘤或腫瘤細(xì)胞。較佳地，所述的腫瘤選自下組乳腺癌、肺癌、胃癌、細(xì)腸癌、前列腺癌、肝癌； 更佳的腫瘤選自下組白血病。在另一優(yōu)選例中，提供了一種2，4_ 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的用途， 用于制備人mir-150的抑制劑。


圖1是小分子化合物2，4-二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的結(jié)構(gòu)式。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)部分腫瘤細(xì)胞內(nèi)mir-150的表達(dá)往往升高，抑制mir-150的表達(dá)和功能可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和體內(nèi)外的致瘤活性。本發(fā)明人運(yùn)用軟件從數(shù)萬(wàn)個(gè)侯選化合物中篩出了若干個(gè)可能會(huì)和mir-150結(jié)合的小分子化合物， 首次得到了一個(gè)可以強(qiáng)烈增強(qiáng)TNF-a癌細(xì)胞系MCF-7增殖抑制作用的化合物2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。具體而言，本發(fā)明人的研究表明，mir-150在白血病組織中的選擇性高表達(dá)，而在正常組織中未見(jiàn)表達(dá)，提示mir-150可能與白血病密切相關(guān)。因此本發(fā)明的研究表明，抗凋亡作用的分子mir-150在細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、 腫瘤發(fā)生等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此，mir-150很可能在臨床腫瘤的診斷和治療中作為潛在的候選靶標(biāo)。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人篩選了大量的化合物，從而獲得了一種可能有效抑制腫瘤的小分子化合物，所述的小分子化合物特異性地在蛋白水平靶向抗凋亡分子-mir-150?；钚猿煞?,4-二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈小分子化合物及其藥學(xué)上可以接受的鹽和活性衍生物。2，4_ 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈是一種指向mir-150的先導(dǎo)化合物。一類特別優(yōu)選的鹽是鈉鹽或鉀鹽。實(shí)施例1小分子化合物2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的篩選
采用計(jì)算機(jī)輔助的虛擬方法進(jìn)行。首先用生物信息學(xué)的方法利用計(jì)算機(jī)軟件建立mir-150的三維結(jié)構(gòu)模型，然后用 D0CK4. 0 (美國(guó)Kimtz實(shí)驗(yàn)室)對(duì)化合物庫(kù)(約20萬(wàn)種)進(jìn)行篩選，根據(jù)打分取最好的100 個(gè)。繼續(xù)使用Flex軟件進(jìn)行對(duì)接，根據(jù)打分取前50個(gè)。接著利用Autodock軟件以Flex 對(duì)接的構(gòu)象為起始構(gòu)象進(jìn)行對(duì)接。最后選定一個(gè)化合物，即2，4_ 二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈。實(shí)施例2小分子化合物2，4- 二氨基-6-(3-甲氧基苯)_5_嘧啶腈對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制本實(shí)施例采用了常規(guī)的MTT法，方法如下先將MCF-7細(xì)胞30000個(gè)細(xì)胞/孔的密度鋪96孔板過(guò)夜，然后把小分子化合物以不同濃度單獨(dú)與人TNF-a聯(lián)合加入。40小時(shí)后每孔加入MTT(5mg/ml) IOul，37度孵育4小時(shí)后用150ul 二甲亞楓溶液紫色結(jié)晶后放置于酶標(biāo)儀以570吸光度檢測(cè)。結(jié)果顯示，2,4- 二氨基-6- (3-甲氧基苯)_5_嘧啶腈可以在5_10ul終濃度顯著增強(qiáng)TNF-a對(duì)細(xì)胞增殖的抑制，而其本身未對(duì)細(xì)胞造成顯著的毒性作用的化合物。以上是對(duì)本發(fā)明的描述而非限定，基于本發(fā)明思想的其它實(shí)施方式，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之中。
權(quán)利要求
1.一種2，4-二氨基-6-(3-甲氧基苯)-5-嘧啶腈的用途，其特征在于，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、和/或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的化合物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的腫瘤或腫瘤細(xì)胞是表達(dá)mir-150的白血病腫瘤或腫瘤細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于生物信息學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合的藥物虛擬篩選平臺(tái)而合成的靶向抑制mir-150合成的新型抗腫瘤小分子先導(dǎo)化合物。該小分子化合物具有滲透性好，毒副作用小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于合成等優(yōu)點(diǎn)。而且可以和腫瘤壞死因子(TNF-α)聯(lián)用，增強(qiáng)后者的腫瘤殺傷效應(yīng)，從而起到治療腫瘤的作用，所以有望發(fā)展成為一種抗腫瘤新藥。
文檔編號(hào)A61P35/02GK102319249SQ201010599108
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2010年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月17日
發(fā)明者曾華宗 申請(qǐng)人:上海聚類生物科技有限公司