專利名稱：一種自異體表皮細(xì)胞混合懸液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有皮膚創(chuàng)面修復(fù)作用的自異體表皮細(xì)胞混合懸液制備方法。屬生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
創(chuàng)面修復(fù)是燒傷治療的重要組成部分，繼各種皮片、皮瓣和微粒皮用于移植手術(shù)后，近年來又興起了表皮細(xì)胞培養(yǎng)和體外構(gòu)建皮膚組織的組織工程技術(shù)，并已成為臨床醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)生物工程領(lǐng)域的研究熱點。表皮細(xì)胞培養(yǎng)和移植技術(shù)可為深度燒傷創(chuàng)面的治療提供充足的皮膚組織，其中，表皮細(xì)胞膜片體外培養(yǎng)和移植技術(shù)已成功用于燒傷患者臨床救治，但細(xì)胞膜片的機(jī)械性能差、對操作水平要求高、難以運輸和與創(chuàng)面基質(zhì)粘著性能差，其臨床應(yīng)用范圍受到了限制。體外培養(yǎng)表皮細(xì)胞以游離方式應(yīng)用于皮膚創(chuàng)面，是以表皮細(xì)胞修復(fù)皮膚創(chuàng)面的一種新方法。

發(fā)明內(nèi)容
為了提高表皮細(xì)胞在創(chuàng)面修復(fù)中的臨床應(yīng)用效果，本發(fā)明提供一種自異體表皮細(xì)胞混合懸液的制備方法，該方法通過將體外培養(yǎng)的自體表皮細(xì)胞和異體表皮細(xì)胞與一定濃度的高分子水溶液混合，使細(xì)胞以懸浮狀態(tài)存在。此細(xì)胞懸液移植到燒傷創(chuàng)面，能夠使創(chuàng)面再上皮化，從而修復(fù)創(chuàng)面。本發(fā)明的技術(shù)方案是取患者自體刃厚皮，通過酶反應(yīng)獲取游離表皮細(xì)胞；實驗室進(jìn)行培養(yǎng)，至一定量時與已儲存的異體表皮細(xì)胞混合進(jìn)行第二階段培養(yǎng)。將培養(yǎng)的自異體表皮細(xì)胞進(jìn)行酶反應(yīng)后得到游離自異體表皮細(xì)胞，將其加入高分子水溶液制備成為自異體表皮細(xì)胞懸液。具體來說，取患者自體皮膚，經(jīng)清洗、消毒，剪裁成為0. 3X0. 3cm的方形小皮片，經(jīng)Dispase酶中消化，分離表真皮。將分離的表皮至于胰蛋白酶溶液中消化后，力口入少量小牛血清終止消化，過濾，離心，重懸細(xì)胞。將上述細(xì)胞與同濃度的異體表皮細(xì)胞混合，體外培養(yǎng)。細(xì)胞增殖后，消化、離心得到游離自異體表皮細(xì)胞。以纖維蛋白膠重懸和稀釋表皮細(xì)胞，得到自異體表皮細(xì)胞混合懸液。
具體實施例方式下面的實例將具體說明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對本發(fā)明的限定。實施例一取患者皮膚，面積為2X 3cm，以生理鹽水充分清洗后，置洗必泰中消毒，剪裁成為 0.3X0. 3cm的方形小皮片，經(jīng)0. 2%的Dispase酶在4°C消化16h，剝離表皮組織。將表皮塊至于0. 25%胰蛋白酶中，在37°C下消化10-20min，加入少量小牛血清終止消化，過濾，離心，以DMEM重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度為2X106/ml。將上述細(xì)胞與同濃度的異體表皮細(xì)胞混合， 至DMEM培養(yǎng)液中，在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2天換液1次。細(xì)胞增殖成團(tuán)簇，細(xì)胞活力大于90%時，消化、離心得到游離自異體表皮細(xì)胞。以纖維蛋白膠重懸和稀釋表皮細(xì)胞，得到終濃度為lX107ml的自異體表皮細(xì)胞混合懸液。
權(quán)利要求
1.一種自異體表皮細(xì)胞混合懸液，其特征在于外觀為透明且成膠狀，是以體外培養(yǎng)自異體表皮和經(jīng)高分子溶液重懸的方法所得到。
2.如權(quán)利要求1所述的自異體表皮細(xì)胞混合懸液，其特征在于表皮細(xì)胞包括從皮膚組織分離培養(yǎng)得到的自體表皮細(xì)胞，和低溫儲藏的異體表皮細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求1所述的自異體表皮細(xì)胞混合懸液，其特征在于自體皮膚經(jīng)分散酶和胰蛋白酶消化得到自體游離表皮細(xì)胞。
4.如權(quán)利要求1所述的自異體表皮細(xì)胞混合懸液，其特征在于自體皮膚經(jīng)分散酶消化10-20小時，經(jīng)胰蛋白酶消化10-50分鐘。
5.如權(quán)利要求1所述的自異體表皮細(xì)胞混合懸液，其特征在于以濃度為1-20%的纖維蛋白水溶液膠體重懸自異體表皮細(xì)胞，自異體表皮細(xì)胞混合懸液的濃度為1-10X107 ml ο
全文摘要
本發(fā)明專利涉及生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，具體涉及一種自異體表皮細(xì)胞混合懸液的制備方法。該自異體表皮細(xì)胞混合懸液是由自體表皮細(xì)胞培養(yǎng)、自異體表皮細(xì)胞培養(yǎng)和自異體表皮細(xì)胞經(jīng)消化、重懸得到的。避免大面積自體植皮手術(shù)對皮膚的損傷，自體表皮細(xì)胞膜片操作復(fù)雜、機(jī)械性能差等缺點，有利于將表皮細(xì)胞應(yīng)用于燒傷創(chuàng)面的治療，提高創(chuàng)面的愈合效率和效果，減少病人的手術(shù)次數(shù)和醫(yī)療支出。
文檔編號A61L27/60GK102488930SQ20111041933
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者呂國忠, 朱宇剛, 蔡良良, 趙朋, 黃繼人 申請人:無錫市第三人民醫(yī)院