專利名稱：FcγRIIB(CD32B)和CD20特異性抗體的組合應用的制作方法
FcyRI IB(CD32B)和CD20特異性抗體的組合應用
背景技術：
本發(fā)明涉及防止抗體Fe結構域和細胞表面Fe Y RIIb之間結合的試劑(agent)。本發(fā)明還涉及包含所述試劑的組合物，所述組合物用于治療具有諸如使用基于抗體的組合物治療的癌細胞的靶細胞的患者。另外，本發(fā)明還涉及預測靶細胞對于基于抗體的治療的響應的方法，特別是在抗體配體對Fe y RIIb介導的內(nèi)化敏感的情況下預測靶細胞對于基于抗體的治療的響應的方法，特別涉及Fe y RIIb表達水平和/或治療性抗體通過Fe y RIIb介導的內(nèi)化作為靶細胞對于所述治療的響應的預后標志物的用途。單克隆抗體(mAb)可產(chǎn)生治療效果的機制是通過招募諸如細胞毒性細胞(例如巨噬細胞)和酶(例如補體)的天然效應系統(tǒng)，然后所述效應系統(tǒng)靶向HiAb結合的細胞，而刺激除去癌細胞和其他不 想要的細胞。例如，I型抗⑶20mAb (例如當前的市場主導藥利妥昔單抗)通過經(jīng)mAb的抗原結合結構域結合B細胞表面上的CD20分子并清除這些靶B細胞而發(fā)揮作用。它們通過招募和激活通過在效應細胞的表面表達的Fe y受體(Fe Y R)而與mAb的Fe結構域相互作用的這些效應細胞來實現(xiàn)這點?？耿?0單克隆抗體(mAb)利妥昔單抗改善了患有濾泡(FL)性淋巴瘤和彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)的患者的總體存活率(OS) (1-4)。在外套細胞淋巴瘤(MCL)中，僅觀察到輕度響應(5)，而在慢性淋巴細胞白血病(CLL)中，起始單劑利妥昔單抗試驗所產(chǎn)生的響應沒有在其他非何杰金淋巴瘤(NHL)中所產(chǎn)生的響應顯著((6)中綜述)。一部分淋巴瘤顯示對利妥昔單抗具有原發(fā)抗性，或者最終對含有利妥昔單抗的聯(lián)合治療產(chǎn)生抗性(7)。該治療抗性及所觀察到的不同NHL亞型對利妥昔單抗治療的敏感性背后的分子基礎當前尚未知，但可能包括⑶20表達水平(8-10)、補體防御分子(⑶55和⑶59)的高表達(11、12)、凋亡抗性的形成(13)以及由于低親和力等位基因表達導致的次佳的Fe Y受體(FcyR)相互作用(14)。非常期望在治療不佳或抗性明顯的情況下提高這些抗體的有效性。通常認為Fe:Fe Y R相互作用對于抗⑶_20mAb的功效至關重要(15_18)。與此相一致，在Fe Y RIIIa中攜帶較高親和力的158V等位基因的淋巴瘤患者要比具有低親和力的158F異型的淋巴瘤患者更好地響應利妥昔單抗(14)，導致許多研究者都集中于提高mAb與Fe y RIIIa的相互作用，例如通過去巖藻糖基化(19)。相比之下，對于抑制性Fe y RIIb則給予較少關注，F(xiàn)e y RIIb用作諸如B細胞抗原受體(BCR)和激活性Fe Y R的攜帶ITAM的受體接收的刺激性活動的負調(diào)節(jié)劑。在B細胞中，該相互作用用于限制免疫復合物結合之后的B細胞增殖，而在巨噬細胞中，F(xiàn)cyRIIb的參與引起細胞毒性活性的抑制(15)。在B細胞惡性腫瘤中，F(xiàn)e Y RIIb表達于CLL/SLL、MCL以及FL上，后者尤其在轉(zhuǎn)化過程中有表達。在DLBCL中，F(xiàn)yRIIb表達較弱，由此解釋了在其表達和對于利妥昔單抗-CHOP (R-CHOP)化療之間未顯示相關性的原因(20，21)。關于激活性Fe Y R，還發(fā)現(xiàn)影響Fe y RIIb活性的多形性，2321等位基因比232T等位基因更有效地抑制BCR介導的鈣流(22，23)。然而，Weng和Levy未能在FL患者中確定這些多形性和對利妥昔單抗治療的響應之間的相關性?？捎糜谂R床研究的抗⑶_20mAb數(shù)量越來越多。根據(jù)這些不同抗⑶20mAb在質(zhì)膜中再分布CD20的能力及其在不同效應細胞測定中的活性將其分類為I型(例如，利妥昔單抗(rituximab)，奧法木單抗(ofatumumab))或 II 型(例如，托西莫單抗(tositumomab) (BI),GAlOl，11B8) (25-27)。發(fā)明人及其他人已經(jīng)證明II型mAb在許多模型系統(tǒng)中均更高效地清除B細胞靶(18，19)。例如，在其中II型mAb引發(fā)溶酶體細胞死亡的較高能力不明顯的人正常B細胞消耗的CD20轉(zhuǎn)基因(Tg)模型(25，27)中，發(fā)明人證明了該效能與其對內(nèi)化的抗性相關(28)。這與諸如利妥昔單抗的I型mAb形成對比，I型mAb在具有能量和溫度依賴性并涉及肌動蛋白再分布的過程中與CD20—起從細胞表面快速內(nèi)化(28)。在來自不同來源的細胞上的調(diào)變(modulation)速率顯著不同(原發(fā)腫瘤對細胞系，CLL對FL)，但這點的分子基礎仍未得到解釋。WO 2008/002933描述了 Fe Y RIIb (CD32B)和CD20特異性抗體及使用這兩種抗體的組合來治療B細胞相關疾病或病癥的方法。然而，沒有識別和/或治療患者亞組的教導或暗示，所述患者亞組即靶細胞Fe y RIIb表達水平升高的那些患者，或其抗體類型適于和Fe y RIIb抗體聯(lián)合治療的患者。出人意料地，發(fā)明人證明不管細胞亞型如何調(diào)變都與Fe y RIIb表面表達顯著相關，過表達能夠?qū)amos細胞由慢調(diào)變細胞轉(zhuǎn)化為快調(diào)變細胞。FcyRIIb的內(nèi)化與⑶20 —起發(fā)生，并在其激活之前發(fā)生。所有這些數(shù)據(jù)為先前在不同NHL亞型內(nèi)和不同NHL亞型之間觀察到的調(diào)變速率的異質(zhì)性提供了明確的分子理論。因此，發(fā)明人證明，決定抗體對諸如CD20的抗原的有效性的關鍵因素是與同一細胞表面的抑制性 Fe y RIIb (還已知為且包括 CD32、CD32B、CD32B1、CD32B2、FcRI1、Fe y RII或FcRIIB)的相互作用，這令人驚訝。該相互作用導致靶細胞對抗體的內(nèi)化，由此去除其與效應細胞Fe受體相互作用的能力。發(fā)明人進一步證明,諸如抗CD32mAb的試劑能夠阻斷這種內(nèi)化。發(fā)明人還證明這樣的試劑可與抗體(例如利妥昔單抗)聯(lián)合用于靶向細胞表面抗原并改善其體內(nèi)清除正常B細胞或腫瘤細胞的活性。本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含:(i)特異性結合靶細胞的細胞表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結合Fe y RIIb的Fe結構域;和(ii)抑制或減少Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結構域結合的試劑，其特征在于，所述組合物用于治療具有Fe YRIIb表達水平升高的靶細胞的患者。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了抑制或減少抗體分子的Fe結構域與靶細胞上的Fe Y RIIb之間結合的試劑的用途，其中所述抗體分子特異性結合靶細胞表面抗原，其特征在于，所述用途為在制備用于治療具有Fe YRIIb表達水平升高的靶細胞的患者的藥物中的用途。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了一種治療具有表達Fe Y RIIb的靶細胞的患者的方法，所述方法包括聯(lián)合施用:(i)特異性結合所述靶細胞的表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結合Fe y RIIb 的Fe結構域；和(ii)抑制或減少所述抗體分子的Fe結構域和Fe y RIIb之間結合的試劑，其特征在于，所述患者是基于靶細胞Fe y RIIb表達水平升高選擇的。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實施方式中，所述試劑抑制或減少靶細胞上存在的Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結構域的結合。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供靶細胞上的Fe YRIIb表達作為所述靶細胞對于使用特異性結合所述靶細胞表面抗原的抗體分子治療的響應的預后標志物的用途，所述抗體分子具有能夠結合Fe y RIIb的Fe結構域，由此Fe y RIIb水平升高提示對使用所述抗體分子治療的響應減少或不響應。在一種實施方式中，靶細胞上的Fe Y RIIb表達作為預后標志物的用途不需要將靶細胞上的Fe y RIIc表達用作預后標志物。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了一種用于預測患者靶細胞對于使用特異性結合靶細胞表面抗原并具有能夠結合Fe YRIIb的Fe結構域的抗體分子治療的響應的方法，其特征在于，所述方法包括測定靶細胞上的Fe y RIIb表達水平，由此Fe Y RIIb水平升高預示對使用所述抗體分子治療的響應減少或不響應。在一種實施方式中，用于預測患者靶細胞響應的方法包括測定所述靶細胞上的Fe y RIIb表達水平，且不另外包括測定所述靶細胞上的Fe y RIIc表達水平。已經(jīng)證明，盡管所有 抗體都具有Fe結合抗體恒定結構域和已知的Fe y受體結合能力，但并非所有抗體均以Fe YRIIb依賴性方式被內(nèi)化，這使得合適抗體的鑒定對包含F(xiàn)e Y RIIb功能調(diào)變劑的聯(lián)合治療的治療成功以及避免無益于患者的治療至關重要。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實施方式中，特異性結合靶細胞的細胞表面抗原的抗體分子也能夠以Fe YRIIb依賴性方式被內(nèi)化至所述細胞中，其中所述抗體具有能夠結合Fe y RIIb的Fe結構域。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實施方式中，抑制或減少Fe YRIIb結合所述抗體分子的Fe結構域的試劑還抑制或減少所述抗體分子被進一步內(nèi)化至所述細胞中。在本發(fā)明組合物、用途或方法的某些實施方式中，所述靶細胞是癌細胞。方便地，所述IE細胞是B細胞。有利地，根據(jù)本發(fā)明，其中所述靶細胞上的Fe YRIIb表達升高是相對于對照或參照而定的。優(yōu)選地，所述對照是與靶細胞相同類型的細胞中Fe y RIIb的正常表達水平?！癋e Y RIIb表達水平升高”在下文的“定義”中有定義。Fe Y RIIb表達水平可計算為Fe Y RIIb的幾何平均熒光強度(幾何MFI或Geo MFI)與同種型對照之比。可選地，F(xiàn)e y RIIb表達水平可通過腫瘤活組織檢查的免疫組織化學來計算。本領域技術人員應理解，有多種用于測定Fe YRIIb表達水平的技術和方法。本發(fā)明還教導了如何鑒定適于與Fe Y RIIb抗體聯(lián)合治療的抗體，所述抗體即以FcYRIIb依賴性方式被靶細胞表面內(nèi)化的那些抗體。本發(fā)明還提供了鑒定適于與Fe y RIIb抗體聯(lián)合治療的患者亞組。在另一方面，本發(fā)明提供了用于鑒定減少或抑制針對靶細胞表面抗原的抗體Fe結構域和靶細胞上的Fe YRIIb之間結合的試劑的測定方法，所述測定方法包括測定在存在和不存在試驗試劑的情況下Fe結構域和Fe y RIIb之間的結合程度。如果試驗試劑減少或抑制了 Fe結構域與Fe YRIIb的結合，則鑒定為有用的試劑。這樣的測定方法還可用于鑒定何種試劑(例如抗體分子)適于與抗Fe Y RIIb抗體的聯(lián)合治療。在另一種優(yōu)選的實施方式中，鑒定可用于本發(fā)明用途和方法實踐中的試劑的測定方法包括篩選阻斷Fe y RIIb刺激/信號傳導的試劑，如通過蛋白質(zhì)印跡檢測細胞內(nèi)ITIM基序中酪氨酸-293的磷酸化所提示的阻斷Fe y RIIb刺激/信號傳導的試劑。例如，在對磷酸化Fe y RIIb進行免疫印跡之前，在存在或不存在抗Fe y RIIb測試試劑的情況下，將Raji細胞與針對細胞表面抗原的抗體(例如，抗CD20mAb利妥昔單抗)一起溫育。磷酸化Fe y RIIb的量在利妥昔單抗刺激的細胞中升高，并且，與圖4A中所示使用ATlO作為阻斷劑相似，應被添加試驗試劑所抑制。另外，根據(jù)

圖1A中所示的淬滅實驗，這些試劑還應優(yōu)選阻斷利妥昔單抗的內(nèi)化。圖2B顯示抗Fe Y RIIb阻斷物(在此情況下為AT10)阻斷的典型實例。這些測定方法還可用于鑒定何種試劑(例如抗體分子)適于與抗Fe Y RIIb抗體聯(lián)合治療。在一種優(yōu)選的實施方式中，用于鑒定適于與Fe Y RIIb抗體聯(lián)合治療的試劑的測定方法計算了內(nèi)化至表達Fe YRIIb的細胞中的試劑(例如，抗體分子)的百分率。該測定方法的特征在于，所述方法包括測定在表達試劑(例如，抗體分子)靶和表達Fe Y RIIb的細胞一起溫育之后保留于細胞表面上的試劑(例如，抗體分子)的百分數(shù)，由此，細胞表面可及的試劑(例如，抗體分子)減少的百分數(shù)可預示對使用所述抗體分子的治療的響應。通過引用并入本文的Neubig et al (2003)Pharmacol.Rev.55, 597-606 描述了可被篩選以鑒定本發(fā)明抑制或減少Fe Y RIIb與抗體分子Fe結構域結合的試劑的多種類型的配體。上述配體可為小的有機或無機物，但優(yōu)選它們?yōu)殡幕蚨嚯摹Ｍǔ?，當配體為小的有機或無機物時，其相對分子量(Mr)為50至2000，例如，100至1000，例如100至500。通常，配體以mM至pM的Kd結合Fe Y Rllb，例如在ii M(微摩爾)至nM范圍。通常，優(yōu)選具有最低Kd的配體。

所述配體可為擬肽、核酸、肽核酸(PNA)或適體。其還可為脂質(zhì)或碳水化合物。所述配體可為結合Fe y RIIb的多肽。這樣的多肽(包括寡肽)通常為Mr 500至Mr 50，000，但可以更大。所述多肽還可為基于模塊框架(modular framework)的結合蛋白，例如錨肽重復序列蛋白、猶餘(armadillo)重復序列蛋白、富亮氨酸蛋白、三十四肽(tetartriopeptide)重復序列蛋白或設計的錨肽重復序列蛋白(DARPins)或基于脂質(zhì)運載蛋白或纖連蛋白結構域或Affilin支架的蛋白。便利地，所述測試試劑為測試化合物文庫，并且優(yōu)選地，該文庫為任何肽文庫、蛋白文庫、抗體文庫、重組組合抗體文庫或scFV或Fab噬菌體展示文庫。優(yōu)選地，在本發(fā)明的組合物、用途或方法中，所述試劑(ii)是特異性結合FcyRIIb的一種或多種抗體分子。便利地，所述一種或多種抗體分子不包括能夠招募效應細胞的結構域。便利地，所述一種或多種抗體分子為一種或多種單克隆抗體分子。優(yōu)選地，所述試劑抑制或減少Fe YRIIb信號傳導。甚至更優(yōu)選地，所述試劑抑制或減少祀細胞對所述抗體分子的內(nèi)化。在下列實施方式中，SEQ ID NO是指在下文克隆1_13中所示的序列。
本領域技術人員應知道，在免疫球蛋白的重鏈和輕鏈可變區(qū)上存在三個互補決定區(qū)(CDR)。本文所述的氨基酸至各CDR的分配與Kabat EA et al.1991，" Sequences ofProteins of Immulogical Interest"，第 5 版，NIH 公布號 91-3242，第 xv_xvii 頁中的定義相一致。本領域技術人員應知道，還有其他用于將氨基酸分配至各⑶R中的方法。例如，International ImMunoGeneTics 信息系統(tǒng)(IMGT (r；) (http:// www.1mgt.0rg/和 AcademicPress, 2001 出版的 Lefranc “The Immunoglobulin FactsBook”)。在一種實施方式中，所述試劑包含含有下列⑶R的重鏈可變區(qū)(VH):(i)SEQ ID N0:29 和 SEQ ID N0:30 和 SEQ ID N0:31 ;或(ii)SEQ ID N0:35 和 SEQ ID N0:36 和 SEQ ID N0:37;或(iii)SEQ ID NO:41和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 ;或(iv) SEQ ID N0:47 和 SEQ ID N0:48 和 SEQ ID NO:49 ;或(v)SEQ ID NO:53 和 SEQ ID NO:54 和 SEQ ID NO: 55 ;或(vi)SEQ ID N0:59 和 SEQ ID N0:60 和 SEQ ID N0:61 ;或(vii)SEQ ID N0:65 和 SEQ ID N0:66 和 SEQ ID N0:67 ;或(viii)SEQ ID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73;或(ix)SEQ ID N0:77 和 SEQ ID N0:78 和 SEQ ID N0:79;或(x)SEQ ID NO:83 和 SEQ ID NO:84 和 SEQ ID NO:85 ;或(xi)SEQ ID N0:89 和 SEQ ID N0:90 和 SEQ ID N0:91 ;或(xii)SEQ ID N0:95 和 SEQ ID N0:96 和 SEQ ID N0:97 ;或(xiii)SEQ ID NO:101和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103。優(yōu)選地，所述試劑包含含有下列⑶R的輕鏈可變區(qū)(VL):(i)SEQ ID N0:32 和 SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:34;或(ii)SEQ ID N0:38 和 SEQ ID N0:39 和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQ ID N0:44 和 SEQ ID N0:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv) SEQ ID NO: 50 和 SEQ ID NO: 51 和 SEQ ID NO: 52 ;或(v)SEQ ID NO:56 和 SEQ ID NO:57 和 SEQ ID NO:58 ;或(vi)SEQ ID N0:62 和 SEQ ID N0:63 和 SEQ ID NO:64 ;或(vii)SEQ ID N0:68 和 SEQ ID N0:69 和 SEQ ID N0:70;或(viii)SEQ ID N0:74 和 SEQ ID N0:75 和 SEQ ID N0:76;或(ix)SEQ ID N0:80 和 SEQ ID N0:81和 SEQ ID N0:82 ;或(x)SEQ ID N0:86 和 SEQ ID N0:87 和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQ ID N0:92 和 SEQ ID N0:93 和 SEQ ID NO:94 ;或

(xii)SEQ ID N0:98 和 SEQ ID N0:99 和 SEQ ID N0:100;或(xiii)SEQ ID NO:104 和 SEQ ID NO:105 和 SEQ ID NO:106。任選地，所述試劑包含選自以下氨基酸序列組成的組的重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列:SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6、SEQ ID NO:7,SEQ ID N0:8、SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和 SEQ ID NO:15。
權利要求
1.組合物，所述組合物包含: (i)抗體分子，所述抗體分子特異性結合靶細胞的細胞表面抗原，且具有能夠結合Fe y RIIb的Fe結構域;和 (ii)試劑，所述試劑抑制或減少Fey RIIb與所述抗體分子的Fe結構域結合， 其特征在于，所述組合物用于治療具有FcyRIIb表達水平升高的靶細胞的患者。
2.抑制或減少抗體分子Fe的結構域與靶細胞上的Fey RIIb之間結合的試劑的用途，其中所述抗體分子特異性結合所述靶細胞的表面抗原，并且其特征在于，所述用途為在制備用于治療具有Fe y RIIb表達水平升高的靶細胞的患者的藥物中的用途。
3.治療具有表達FeY RIIb的靶細胞的患者的方法，所述方法包括聯(lián)合施用:(i)特異性結合所述靶細胞的表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結合Fe y RIIb的Fe結構域；和Qi)抑制或減少所述抗體分子的Fe結構域和Fe y RIIb之間結合的試劑,其特征在于，所述患者是基于其靶細胞的Fe YRIIb表達水平升高來選擇的。
4.靶細胞上的Fey RIIb表達作為所述靶細胞對于使用抗體分子治療的響應的預后標志物的用途，所述抗體分子特異性結合所述靶細胞的表面抗原，且所述抗體分子具有能夠結合Fe y RIIb的Fe結構域，由此Fe y RIIb水平升高表明對使用所述抗體分子治療的響應減少或不響應。
5.用于預測患者靶細胞對于使用抗體分子治療的響應的方法，所述抗體分子特異性結合靶細胞表面抗原并具有能夠結合Fe Y RIIb的Fe結構域，其特征在于，所述方法包括測定所述靶細胞上的Fe y RIIb表達水平，由此Fe y RIIb水平升高預示對使用所述抗體分子治療的響應減少或不響應。
6.根據(jù)權利要 求1-3任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑抑制或減少所述革G細胞上的Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結構域結合。
7.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中特異性結合靶細胞表面抗原且具有能夠結合Fe y RIIb的Fe結構域的所述抗體分子能夠以Fe y RIIb依賴性方式被內(nèi)化至所述靶細胞中。
8.根據(jù)權利要求1-3和6-7任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述抑制或減少Fe y RIIb與所述抗體分子Fe結構域的結合的試劑還抑制或減少所述抗體分子內(nèi)化至所述靶細胞中。
9.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述靶細胞是癌細胞。
10.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述靶細胞是B細胞。
11.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中待治療的所述患者為癌癥患者，所述治療為癌癥治療。
12.根據(jù)權利要求9-11任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述癌癥選自非何杰金淋巴瘤，例如濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、外套細胞淋巴瘤或慢性淋巴細胞性白血病。
13.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑為下述任一者:多肽；anticalin ;肽；抗體；嵌合抗體；單鏈抗體；適體；darpin ;Fab、F(ab ' )2、Fv、ScFv或dAb抗體片段；小分子；天然產(chǎn)物；親和體；擬肽；核酸；肽核酸分子；脂質(zhì)；碳水化合物；基于模塊框架的蛋白，包括錨蛋白重復序列蛋白、犰狳重復序列蛋白、富亮氨酸蛋白、三十四肽重復序列蛋白或設計的錨蛋白重復序列蛋白(DARPins)。
14.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑為特異性結合Fe y RIIb的一種或多種抗體分子。
15.根據(jù)權利要求14所述的組合物、用途或方法，其中所述一種或多種抗體分子不包含能夠招募效應細胞的結構域。
16.根據(jù)權利要求15所述的組合物、用途或方法，其中所述一種或多種抗體分子為單克隆抗體分子。
17.根據(jù)權利要求1-3和6-16任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含含有下列⑶R的重鏈可變區(qū)(VH):(i)SEQID NO:29 和 SEQ ID NO:30 和 SEQ ID NO:31 ;或 (ii)SEQID NO:35 和 SEQ ID NO:36 和 SEQ ID NO:37;或(iii)SEQID NO:41 和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 ;或(iv)SEQID NO:47 和 SEQ ID N0:48 和 SEQ ID N0:49 ;或(v)SEQID NO:53 和 SEQ ID NO:54 和 SEQ ID NO:55;或(vi)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:60 和 SEQ ID NO:61 ;或(vii)SEQID NO:65 和 SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 ;或(viii)SEQID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73;或(ix)SEQID NO:77 和 SEQ ID NO:78 和 SEQ ID NO:79;或(x)SEQID NO:83 和 SEQ ID NO:84 和 SEQ ID NO:85 ;或(xi)SEQID NO:89 和 SEQ ID NO:90 和 SEQ ID NO:91 ;或(xii)SEQID NO:95 和 SEQ ID NO:96 和 SEQ ID NO:97 ;或(xiii)SEQID NO:101 和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103。
18.根據(jù)權利要求1-3和6-17任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含含有下列CDR的輕鏈可變區(qū)(VL):(i)SEQID NO:32 和 SEQ ID NO:33 和 SEQ ID NO:34;或(ii)SEQID NO:38 和 SEQ ID NO:39 和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQID NO:44 和 SEQ ID NO:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv)SEQ ID NO: 50 和 SEQ ID NO: 51 和 SEQ ID NO: 52;或(v)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:57 和 SEQ ID NO:58;或(vi)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:63 和 SEQ ID NO:64 ;或(vii)SEQID NO:68 和 SEQ ID NO:69 和 SEQ ID NO:70;或(viii)SEQID NO:74 和 SEQ ID NO:75 和 SEQ ID NO:76;或(ix)SEQID NO:80 和 SEQ ID NO:81 和 SEQ ID NO:82 ;或(x)SEQID NO:86 和 SEQ ID NO:87 和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQID NO:92 和 SEQ ID NO:93 和 SEQ ID NO:94 ;或(xii)SEQID NO:98 和 SEQ ID NO:99 和 SEQ ID NO: 100;或(xiii)SEQID NO:104 和 SEQ ID NO:105 和 SEQ ID NO:106。
19.根據(jù)權利要求1-3和6-18任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含選自以下氨基酸序列組成的組的重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14 和 SEQ ID NO:15。
20.根據(jù)權利要求1-3和6-19任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含選自以下氨基酸序列組成的組的輕鏈可變區(qū)(VL)氨基酸序列:SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27 和 SEQ ID NO:28。
21.根據(jù)權利要求1-3和6-20任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含以下⑶R氨基酸序列:(i)SEQID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30和 SEQ ID NO: 31 和 SEQ ID NO: 32和 SEQ ID NO: 33和 SEQ ID NO:34 ;或(ii)SEQID NO:35和SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQID NO:41 和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 和 SEQ ID NO:44 和 SEQ IDNO:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv)SEQID NO:47和SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51和 SEQ ID NO:52 ;或(v)SEQID NO: 53 和 SEQ ID NO: 54 和 SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 和 SEQ ID NO: 57和 SEQ ID NO:58 ;或(vi)SEQID NO:59和SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61 和SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63和 SEQ ID NO:64 ;或 (vii)SEQID NO:65 和 SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:68 和 SEQ IDNO:69 和 SEQ ID NO:70 ;或(viii)SEQID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74 和 SEQ IDNO:75 和 SEQ ID NO:76 ;或(ix)SEQID NO:77和SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81和 SEQ ID NO:82 ;或(x)SEQID NO:83 和 SEQ ID NO:84和 SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:86和 SEQ ID NO:87和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQID NO:89和SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91 和SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93和 SEQ ID NO:94 ;或(xii)SEQID NO:95 和 SEQ ID NO:96 和 SEQ ID NO:97 和 SEQ ID NO:98 和 SEQ IDNO:99 和 SEQ ID NO: 100 ;或(xiii)SEQID NO:101 和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103 和 SEQ ID NO:104 和 SEQID NO:105 和 SEQ ID NO:106。
22.根據(jù)權利要求1-3和6-21任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑包含以下氨基酸序列:(i)SEQID NO:3 和 SEQ ID NO: 16;或(ii)SEQIS NO:4 和 SEQ ID NO: 17;或(iii)SEQIS NO:5 和 SEQ ID NO: 18;或(iv)SEQ ID NO: 6 和 SEQ ID NO: 19;或(v)SEQID NO:7 和 SEQ ID NO:20;或(vi)SEQID NO:8 和 SEQ ID NO:21 ;或(vii)SEQID NO:9 和 SEQ ID NO:22;或(viii)SEQID NO: 10 和 SEQ ID NO:23;或(ix)SEQID NO: 11 和 SEQ ID NO:24;或(x)SEQID NO: 12 和 SEQ ID NO:25;或(xi)SEQID NO: 13 和 SEQ ID NO:26;或(xii)SEQID NO: 14 和 SEQ ID NO:27;或(xiii)SEQID NO:15 和 SEQ ID NO:28。
23.根據(jù)權利要求1-3和6-16任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑能夠與權利要求17-22所述的試劑競爭，從而用于抑制或減少Fe y RIIb與所述抗體分子的Fe結構域的結合。
24.根據(jù)權利要求1-3和6-23任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑抑制或減少Fe Y RIIb信號傳導。
25.根據(jù)權利要求1-3和6-24任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述試劑抑制或減少所述抗體分子被 所述靶細胞內(nèi)化。
26.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述細胞表面抗原選自CD19、CD20 或 CD40。
27.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述特異性結合細胞表面抗原的抗體分子為CD20抗體。
28.根據(jù)權利要求27所述的組合物、用途或方法，其中所述CD20抗體為I型CD20抗體。
29.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述細胞表面抗原為CD20，所述特異性結合細胞表面抗原的抗體分子為I型抗體。
30.根據(jù)前述權利要求任一項所述的組合物、用途或方法，其中所述靶細胞上的Fe y RIIb表達升高是相對于對照而確定的，優(yōu)選地，所述對照是Fe y RIIb在與所述靶細胞相同類型的細胞中的正常表達水平。
31.組合物，其基本上如本文說明書和附圖所述。
32.用途，其基本上如本文說明書和附圖所述。
33.方法，其基本上如本文說明書和附圖所述。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療具有表達FcγRIIb的靶細胞的患者的方法，所述方法包括聯(lián)合施用(i)特異性結合所述靶細胞的表面抗原的抗體分子，所述抗體分子具有能夠結合FcγRIIb的Fc結構域；和(ii)抑制或減少所述抗體分子的Fc結構域和FcγRIIb之間結合的試劑，其特征在于，所述患者是基于其靶細胞的FcγRIIb表達水平升高來選擇的。
文檔編號A61P35/02GK103080131SQ201180040351
公開日2013年5月1日 申請日期2011年8月19日 優(yōu)先權日2010年8月20日
發(fā)明者馬克·克拉格, M·格蘭尼, 阿里·魯加尼安, 斯蒂芬·貝爾斯, P·約翰遜, 肖恩·林, 比約恩·弗倫多斯, 英格麗德·泰格 申請人:南安普敦大學