專利名稱：治療劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療有AIDS(獲得性免疫缺陷綜合癥)或沒有AIDS的HIV感染的治療劑。
人們知道，AIDS是由逆轉(zhuǎn)錄病毒科的一種病毒引起的，該病毒稱為HIV(人類免疫缺陷病毒)。然而，感染上HIV并不立即出現(xiàn)明顯的AIDS癥狀。使病毒暴露的唯一指征是，在受感染者的血液中可以存在抗體，繼而稱該受感染者“HIV陽性”。感染階段可以處于休眠狀態(tài)，不出現(xiàn)任何明顯的癥狀。AIDS發(fā)育期前的潛伏期可以是從數(shù)月到數(shù)十年不等。AIDS發(fā)育期之前可以是AIDS相關(guān)綜合征(ARC)，AIDS相關(guān)綜合征的特征為無緣由的發(fā)燒，體重減輕，慢性咳嗽或腹瀉。
對于在感染上病毒和感染個體的免疫系統(tǒng)崩潰之間的可變更期限的原因了解甚少。目前未知的因素可能導(dǎo)致病毒的繁殖，從而破壞免疫系統(tǒng)。于是該病人會患有各種感染并且由于免疫系統(tǒng)失去作用而惡化導(dǎo)致死亡。
HIV感染與結(jié)核病間的聯(lián)系眾所周知。HIV感染的早期結(jié)果是使以前休眠的結(jié)核桿菌復(fù)能。維持對分支桿菌的抵抗力是個主動的免疫過程，該過程由于HIV感染而遭到破壞。在雙重感染的病人中休眠結(jié)核桿菌的復(fù)能速度快且該復(fù)能通常發(fā)生在出現(xiàn)其它的HIV/AIDS相關(guān)感染之前，這強(qiáng)烈地暗示HIV感染的重要結(jié)果正是破壞了可能是T-細(xì)胞傳遞的維持分支桿菌休眠的免疫功能。
也有證據(jù)表明，HIV感染加上活動性結(jié)核病時，CD4T細(xì)胞明顯減少，從而使AIDS的明顯癥狀非常迅速地發(fā)展。事實(shí)上似乎是，在結(jié)核病中釋放的免疫遞質(zhì)加速了HIV前病毒的復(fù)能轉(zhuǎn)化(transactivation)。
我們曾敘述了衍生自分支桿菌屬M(fèi)ycobacteriumvaccae'用于治療結(jié)核病的抗原和/或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)的用途(見，例如英國專利第2156673號和美國專利第4724144號)。在我們的國際專利申請第PCT/GB90/01169號(公開號為WO91/01751)中描述了同種物質(zhì)用在免疫預(yù)防治療AIDS，即延長在感染HIV和AIDS的發(fā)育之間這一時期方面的用途。
現(xiàn)在我們發(fā)現(xiàn)該相同的治療劑不僅能推遲HIV感染病的AIDS發(fā)育，而且能夠減輕或甚至消除即使是病情嚴(yán)重的患者的AIDS的明顯癥狀。在也患有結(jié)核病的患者身上發(fā)現(xiàn)了這些結(jié)果，而在有或沒有AIDS以沒與結(jié)核病無關(guān)的HIV感染的病人身上也預(yù)期能得到這些結(jié)果。
因此，本發(fā)明提供抗原和/或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)的用途，該物質(zhì)為衍生自Mycobacteriumvaccae用于生產(chǎn)可用于治療與結(jié)核病相關(guān)或無關(guān)的AIDS以及也治療與結(jié)核病相關(guān)或無關(guān)的HIV陽性無癥狀的病人的藥物。該物質(zhì)可給例如HIV陽性以及表現(xiàn)出也有或沒有結(jié)核病的明顯癥狀的AIDS的患者使用，給藥量按足以至少能阻止癥狀發(fā)展的劑量。
因此，本發(fā)明治療劑含有M.vaccae的死細(xì)胞比較好，含有經(jīng)高壓滅菌法殺死的細(xì)胞最好。免疫治療劑為通常每毫升稀釋劑中含微生物108以上，最好是每毫升稀釋劑中含殺死的M.vaccae微生物108-1011。本發(fā)明包括得自M.vaccae用于治療有或沒有AIDS和HIV感染和與結(jié)核病相關(guān)或無關(guān)的HIV感染的抗原和/或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)。
稀釋劑可以是注射用無熱原鹽水，或是PH9.0的硼酸鹽緩沖液。稀釋劑應(yīng)該滅菌。適宜的硼酸鹽緩沖液為Na2B4O7.10H2O 3.63gH3BO35.25gNaCl6.19g
Tween0.0005%蒸餾水至1升優(yōu)選的M.vaccae菌株是從烏干達(dá)中部Lango地區(qū)的泥漿樣品中分離出來并用R877R表示的菌株(J.L.Stanford和R.C.Paul，Ann.Soc.BelgeMed，Trop.1973，53，第141-389頁)。該菌株是穩(wěn)定的粗略變種并屬于aurum亞種。可用生化和抗原的判斷的標(biāo)準(zhǔn)鑒定其屬于M.vaccae(R.Bonicke，S.E.Juhasz，Zentralbl.Bakteriol.Parasitenkd.InfectionSkr.Hyg.Abt.1，Orig.，1964，192，第133頁)。
由R877R表示的菌株被保存在NationalCollectionofTypeCultures(NCTC)CentralPublicHealthLaboratory，ColindaleAvenue，倫敦NW95HT，存放日期為聯(lián)合王國1984年2月13日，編號為NCTC11659號。
就該免疫治療劑的制備而言，微生物M.vaccae可以在適當(dāng)?shù)墓腆w培養(yǎng)基中生長。優(yōu)選改良的Sartor氏液體培養(yǎng)基(S.V.Boyden和E.Sorkin.，J.Immunol，1955，75，第15頁)，用瓊脂固化。
固體培養(yǎng)基最好含1.3%瓊脂。將用微生物接種后的培養(yǎng)基有氧培養(yǎng)以使該微生物能夠生長，一般于32℃培養(yǎng)10天。獲得生物體，然后稱重并將其懸浮于稀釋劑中。稀釋劑可以是非緩沖鹽水但最好是硼酸鹽緩沖的并含有如上所述諸如吐溫80的表面活性劑。將懸浮液稀釋，得到100mg微生物/ml的懸浮液。最好用硼酸鹽緩沖鹽水進(jìn)一步稀釋，以使懸浮液成為含10mg微生物(濕重)/ml稀釋劑的懸浮液。然后分裝于5ml多劑小瓶中。盡管瓶中的微生物可以用輻射例如劑量為2.5兆拉德的鈷60輻射或用其它任何手段例如化學(xué)方法殺死，但優(yōu)選高壓血菌法殺滅微生物，例如在10磅/平方英寸的壓力下滅菌10分鐘(115°-125℃)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)高壓滅菌法能生產(chǎn)出比輻射滅菌法更有效的制劑。
免疫治療通常是真皮內(nèi)注射給藥，注射體積在0.1-0.2ml范圍內(nèi)，最好是0.1ml。每個單劑量一般含107-1010殺死的M.vaccae微生物。最好給病人使用含108-109殺死的M.vaccae的單劑，但可以根據(jù)病人的情況重復(fù)該劑量。
盡管免疫治療劑通常是真皮內(nèi)注射核藥，但也可以使用其它給藥途徑，例如口服。
本發(fā)明包括治療有或沒有AIDS的HIV感染以及有或沒有與結(jié)核病有關(guān)的AIDS的HIV感染的方法，它包括給有或沒有AIDS的HIV感染以及與結(jié)核病有關(guān)或無關(guān)的HIV感染的患者使用衍生自Mycobacteriumvaccae的抗原和/或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)，用量按足以產(chǎn)生對AIDS癥狀有效的免疫反應(yīng)的劑量。
對于20-50%HIV感染的非洲病人來說，結(jié)核病是AIDS發(fā)育期的第一個癥狀，在一組接受結(jié)核病治療的病中有17人由WellcomeELISA檢查為HIVI血清反應(yīng)陽性，針對他們的結(jié)核病，給所有的病人開了鏈霉素、異煙肼、利福平和吡嗪酰胺?？s短治療時間，在任何情況下治療時間都沒超過3個月，17個病人中，8個接受本發(fā)明治療劑，其余9個給予安慰劑(鹽水)。跟蹤調(diào)查，約1年后僅有三個只接受了抗結(jié)核藥物治療的病人活下來了，但所有三個人的結(jié)核病都加重了。8個接受本發(fā)明治療劑中的7個人痰涂片檢查變成抗酸桿菌(例如結(jié)核桿菌)陰性并且病情的綜合改善情況類似于HIV外部陽性的結(jié)核病人。在診斷時，8個病人中的5個出現(xiàn)淋巴結(jié)病，但在跟縮調(diào)查時都消退了。在跟蹤調(diào)查時，其中2個病人再進(jìn)行血清學(xué)檢查時發(fā)現(xiàn)HIVl陰性。
使用一種以上M.vaccat菌株和/或包括其它分支桿菌抗原的治療劑是有利的并在本發(fā)明范圍內(nèi)，也可以包括結(jié)核菌素。
治療劑也可含卡介面，尤其是該疫苗的冷凍干燥品以增強(qiáng)該治療劑的效果。
治療劑可以含其它成分，例如輔助劑、防腐劑、穩(wěn)定劑等?？梢詫⒅委焺┲瞥蓽缇⑸湟夯蚴褂们翱膳渲频臏缇鋬龈稍锂a(chǎn)品。
可以使用M.vaccae或該有機(jī)體的提取物或分出的部分制備本發(fā)明治療劑。
下列實(shí)施例描述用于本發(fā)明的治療劑的制備。
實(shí)施例M.vaccee生長在固體培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為用1.3%瓊脂固化的改良Sauton氏培養(yǎng)基。將微生物接種于該培養(yǎng)基并于32℃培養(yǎng)10天，使微生物能夠生長。然后收集微生物，稱重并將其懸浮于稀釋劑中，得到100mg微生物/ml稀釋劑的懸浮液。然后將該懸浮液進(jìn)一步用緩沖鹽水稀釋至得到含10mg微生物(濕重)/ml稀釋劑的懸浮液，并將其分裝至5ml多劑小瓶中。然后將含活微生物的小瓶于10磅/平方英寸壓力下高壓滅菌10分鐘以殺死微生物，得到本發(fā)明的免疫治療劑，必要時可將其進(jìn)一步稀釋使用。
該免疫治療劑可按已述方法皮肉注射給藥。
權(quán)利要求
1.含有衍生自Mycobacteriumvaccae的抗原和/或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)的用于治療有或沒有AIDS以及與結(jié)核病有關(guān)或無關(guān)的HIV感染的免疫治療劑。
2.權(quán)利要求1的治療劑，其中源自M.Vaccae的抗原和/或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)包括M.vaccae的死細(xì)胞。
3.按照權(quán)利要求1的治療劑，其中M.vaccae的細(xì)胞已為高壓滅菌法殺死。
4.按照權(quán)利要求1的治療劑，其中衍生自M.vaccae的物質(zhì)來自被保存在NationalCollectionofTypeCultures(NCTC)CentralPublicHealthLaboratory，Colindale路，倫敦NW95HT，存放日期為聯(lián)合王國1984年2月13日，編號為NCTC11659的菌株。
5.按照上述任一權(quán)利要求的治療劑，其中衍生自M.vacea的物質(zhì)被包含在每劑含有107-1010微生物的藥物中。
全文摘要
本發(fā)明涉及用衍生自Mycobacterium vaceae的抗原和/或免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)的治療有或沒有AIDS以及與結(jié)核病有關(guān)或無關(guān)的HIV感染。
文檔編號A61P31/12GK1089478SQ93117218
公開日1994年7月20日 申請日期1993年9月8日 優(yōu)先權(quán)日1992年9月14日
發(fā)明者J·L·施丹福, G·A·W·羅克 申請人:倫敦大學(xué)學(xué)院