專利名稱：骨肽注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種注射液的制備方法，尤其涉及一種骨肽注射液的制備方法及由該制備方法得到的產(chǎn)品，屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
骨肽注射液(骨寧注射液)提取自哺乳動(dòng)物例如豬或牛的四肢骨，自1976年由南京生化藥廠開發(fā)出來(lái)后，已在臨床使用了近30年，主要用于治療各種關(guān)節(jié)炎，能消炎止痛，療效確切。近年來(lái)，所發(fā)現(xiàn)的骨肽注射液的治療范圍越來(lái)越廣，如用于治療骨質(zhì)疏松(劉維潤(rùn)等，濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，第26卷第6期，2003，pp395)，也用于治療四肢長(zhǎng)骨骨折不愈合(薛云峰，河南外科學(xué)雜志，第10卷第2期，2004，pp16～17)。隨著近年來(lái)分子藥理學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)從哺乳動(dòng)物例如豬或牛的四肢骨提取液中含有多種活性多肽物質(zhì)，這些活性多肽能調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細(xì)胞增殖，促進(jìn)新骨形成并調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，所以還可防治骨質(zhì)疏松和骨折，其臨床用途正在不斷擴(kuò)大。
骨肽注射液的傳統(tǒng)制備方法除存在工藝復(fù)雜、步驟煩瑣等缺陷外(參見《動(dòng)物生化制藥學(xué)》P283，人民衛(wèi)生出版社出版，1981年版)，且其有效成分骨肽含量較低，雜質(zhì)較多，限制了其有效應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的骨肽注射液，該骨肽注射液生產(chǎn)周期短、制備工藝簡(jiǎn)捷，有效成分骨肽含量高，且雜質(zhì)含量少。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下技術(shù)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的骨肽注射液，可以由以下方法制備而成
1、將新鮮或冷凍保存的哺乳動(dòng)物骨，洗凈打碎稱重，碎骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過(guò)濾，合并煮提液，放至室溫；將煮提液在在-4～8℃的低溫下放置1～40小時(shí)，然后去除表層脂肪，將提取液溫?zé)岷箅x心過(guò)濾，收集濾液備用；2、將濾液真空濃縮，攪拌下加入為濾液重量1～5倍的95％乙醇，靜置沉淀完全后，虹吸出上層醇液，定容回收乙醇，水提液留用；3、將水提液直接或者加等體積蒸餾水，依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離子樹脂柱、弱堿性陰離子樹脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，去雜純化，得純凈稀藥液；4、將純凈稀藥液濃縮后，加壓過(guò)微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌即得，或者，為了制備凍干粉針劑，可以將純凈稀藥液經(jīng)過(guò)常規(guī)方法冷凍干燥，得到凍干粉，制得骨肽注射液凍干粉針劑。
將藥液進(jìn)行凍干處理時(shí)，凍干方法沒(méi)有限制，可以使用常規(guī)的凍干技術(shù)，例如冷凍凍干生產(chǎn)法，溶媒結(jié)晶生產(chǎn)法。
上述制備方法中，其中步驟1)中所述的哺乳動(dòng)物骨優(yōu)選豬或牛的四肢骨；碎骨用鹽水熱壓煮提兩次；所用鹽水的濃度為0.15～0.2M；將煮提液在在-4～8℃的低溫下優(yōu)選放置8小時(shí)以上；步驟2)中優(yōu)選攪拌下加入為濾液重量2～3倍的95％乙醇；步驟4)中優(yōu)選將純凈稀藥液濃縮至骨原料投料重的0.5～0.8倍，更優(yōu)選為0.67倍(V/W)；步驟4)中將純凈稀藥液濃縮后，加壓過(guò)0.2um微孔濾膜。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明骨肽注射液其有效成分—骨肽含量高，雜質(zhì)少，其制備工藝簡(jiǎn)捷，生產(chǎn)周期短，非常有利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
以下通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明的有益效果，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式取新鮮豬四肢骨，洗凈打碎，稱50kg，加100L 0.15mol的NaCL溶液，于0.12兆帕，123℃熱壓提取2h，100目細(xì)布離心過(guò)濾，骨渣同樣條件再提取一次過(guò)濾，合并兩次濾液，得提取液200L；水提液先放至室溫后，轉(zhuǎn)放于冷藏室內(nèi)4℃下存放過(guò)夜，次日除盡上層脂肪，下部提取液微溫?zé)岷?00目細(xì)布離心過(guò)濾；過(guò)濾液入真空濃縮罐，濃縮至35L時(shí)，放出降溫，攪拌下加入70L95％的乙醇，攪拌10min，靜置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液；將醇液回收乙醇至70L，余水藥液約34L；向水藥液中加入34L蒸餾水，攪勻后，依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離子樹脂柱(7kg)，弱堿性陰離子樹脂柱(10kg)，珠狀殼聚糖柱(3kg)，殼聚糖改性活性炭柱(3kg)，均控制流速5ml/min.cm2；將過(guò)柱后稀藥液裝入真空濃縮罐，濃縮至33.5L，用藥液泵加壓過(guò)0.2um微孔濾膜，將濾液灌裝，2ml/支，熔封，115℃熱壓滅菌30min，得16750支。
經(jīng)檢測(cè)(檢測(cè)方法參照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-XG-035-2000項(xiàng)下含量測(cè)定檢驗(yàn))，本實(shí)施例所制備的注射液中每毫升的骨肽含量為8mg；而采用現(xiàn)有技術(shù)所制備的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量為6mg。
1、取冷凍保鮮的羊四肢骨，解凍后，洗凈、打碎，稱100kg，加200L 0.2mol的NaCL水，于0.122兆帕，125℃條件下熱壓提取1.5h，用100目濾布離心過(guò)濾。骨渣同樣條件再提取一次，甩濾，合并兩次濾液，得提取液400L。
2、水提液放至室溫后，轉(zhuǎn)移到冷藏室內(nèi)-4℃下存放過(guò)夜。次日除去上層脂肪，下方提取液微溫?zé)岷?，?00目濾布離心甩濾。
3、過(guò)濾液裝入真空濃縮罐，濃縮至70L時(shí)，放出藥液降溫，于攪拌下加入150L 95％的乙醇，攪拌10min，靜置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液。
4、將醇液裝入酒精回收塔，回收乙醇至150L，放出所余水藥液約67L。
5、向水藥液中加入67L蒸餾水，攪勻后，依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離樹脂柱(裝量14kg)，弱堿性陰離子樹脂柱(裝量20kg)，珠狀殼聚糖柱(裝量6kg)，殼聚糖改性活性炭柱(裝量6kg)，均控制流速為5ml/min.cm2。
6、將過(guò)柱后的稀藥液轉(zhuǎn)移至真空濃縮罐中，濃縮至67L，用藥液泵加壓通過(guò)0.2mm的微孔濾膜。
7、灌裝，2ml/支，熔封，115℃熱壓滅菌30min，得產(chǎn)品33500支，含量2ml12mg。
經(jīng)檢測(cè)(檢測(cè)方法參照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-XG-035-2000項(xiàng)下含量測(cè)定檢驗(yàn))，本實(shí)施例所制備的注射液中每毫升的骨肽含量為8mg；而采用現(xiàn)有技術(shù)所制備的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量為6mg。
1、取冷凍保鮮的牛四肢骨，解凍后，洗凈、打碎，稱100kg，加200L 0.18mol的NaCL水，于0.122兆帕，125℃條件下熱壓提取1.5h，用100目濾布離心過(guò)濾。骨渣同樣條件再提取一次，甩濾，合并兩次濾液，得提取液400L。
2、水提液放至室溫后，轉(zhuǎn)移到冷藏室內(nèi)8℃下存放過(guò)夜。次日除去上層脂肪，下方提取液微溫?zé)岷?，?00目濾布離心甩濾。
3、過(guò)濾液裝入真空濃縮罐，濃縮至70L時(shí)，放出藥液降溫，于攪拌下加入200L 95％的乙醇，攪拌10min，靜置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液。
4、將醇液裝入酒精回收塔，回收乙醇至200L，放出所余水藥液約67L。
5、向水藥液中加入67L蒸餾水，攪勻后，依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離樹脂柱(裝量14kg)，弱堿性陰離子樹脂柱(裝量20kg)，珠狀殼聚糖柱(裝量6kg)，殼聚糖改性活性炭柱(裝量6kg)，均控制流速為5ml/min.cm2。
6、將過(guò)柱后的稀藥液轉(zhuǎn)移至真空濃縮罐中，濃縮至67L，用藥液泵加壓通過(guò)0.2mm的微孔濾膜。
7、灌裝，2ml/支，熔封，115℃熱壓滅菌30min，得產(chǎn)品33500支。
經(jīng)檢測(cè)(檢測(cè)方法參照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-XG-035-2000項(xiàng)下含量測(cè)定檢驗(yàn))，本實(shí)施例所制備的注射液中每毫升的骨肽含量為8mg；而采用現(xiàn)有技術(shù)所制備的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量為6mg。
本發(fā)明骨肽注射液治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎臨床療效觀察試驗(yàn)將32例膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)患者隨機(jī)分為兩組，一組為治療組，16人；另一組為對(duì)照組，16人；治療組每天在關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射本發(fā)明實(shí)施例1所制備的骨肽注射液3ml，每周1次，對(duì)照組注射市售骨肽注射4ml，每周2次。治療一個(gè)月，隨訪3個(gè)月，根據(jù)Goidberg VM及Legnesne MG的膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎臨床評(píng)估指數(shù)分表進(jìn)行評(píng)分，然后根據(jù)治療前后的積分差，評(píng)定療效。以治療前后肌膚差大于50分為優(yōu)，30～49分為良，10～29分為可，小9分為差，結(jié)果見表1。
表1 治療的結(jié)果比較

由表1可見，本發(fā)明骨肽注射液與現(xiàn)有市售骨肽注射液相比，在用量較少的情況下，療效更高。
權(quán)利要求
1.一種制備骨肽注射劑的方法，包括以下步驟1)、將哺乳動(dòng)物骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過(guò)濾，合并煮提液，在-4～8℃的低溫下放置1～40小時(shí)，去除表層脂肪，將提取液溫?zé)岷箅x心過(guò)濾，收集濾液備用；2)、將濾液真空濃縮，攪拌下加入為濾液重量1～5倍的95％乙醇，靜置沉淀完全后，虹吸出上層醇液，水提液留用；3)、將水提液依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離子樹脂柱、弱堿性陰離子樹脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，得純凈稀藥液；4)、將純凈稀藥液濃縮后，加壓過(guò)微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌得到骨肽注射液；或者將純凈稀藥液經(jīng)冷凍干燥，得到凍干粉，得骨肽凍干粉針劑。
2.按照權(quán)利要求1的制備方法，其特征是步驟1)中所述哺乳動(dòng)物骨為豬、?；蜓虻乃闹?。
3.按照權(quán)利要求1的制備方法，其特征是步驟1)中所用鹽水的濃度為0.15～0.2M。
4.按照權(quán)利要求1的制備方法，其特征是步驟1)中將哺乳動(dòng)物骨用鹽水熱壓煮提2次。
5.按照權(quán)利要求1的制備方法，其特征是步驟2)中將濾液真空濃縮，攪拌下加入為濾液重量2～3倍的95％乙醇。
6.按照權(quán)利要求1的制備方法，其特征是步驟4)中將純凈稀藥液濃縮至骨原料投料重的0.5～0.8倍(V/W)。
7.按照權(quán)利要求6的制備方法，其特征是步驟4)中將純凈稀藥液濃縮至骨原料投料重的0.67倍(V/W)。
8.按照權(quán)利要求1的制備方法，其特征是步驟4)中將純凈稀藥液濃縮后，加壓過(guò)0.2um微孔濾膜。
9.一種骨肽注射液，其特征是由權(quán)利要求1～8任一所述方法制備得到的產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的骨肽注射液制備方法及由該方法得到的產(chǎn)品，其制備方法如下1).將哺乳動(dòng)物骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過(guò)濾，合并煮提液，在低溫下放置1～40小時(shí)，將提取液溫?zé)岷箅x心過(guò)濾，收集濾液備用；2).將濾液真空濃縮后加入乙醇，靜置沉淀，吸出上層醇液，定容回收乙醇，得水提液；3).將水提液加等體積蒸餾水，依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離子樹脂柱、弱堿性陰離子樹脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，去雜純化，得純凈稀藥液；4).將純凈稀藥液濃縮后，加壓過(guò)微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌，或?qū)⑺盟幰和ㄟ^(guò)冷凍干燥，得到凍干粉針劑。本發(fā)明骨肽注射液含有較高的骨肽成分，制備工藝簡(jiǎn)捷，生產(chǎn)周期短。
文檔編號(hào)A61K35/32GK1698655SQ20051007691
公開日2005年11月23日 申請(qǐng)日期2005年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月9日
發(fā)明者趙紅梅 申請(qǐng)人:趙紅梅