專利名稱：皂苷化合物及其制備方法與在制備免疫佐劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)，具體涉及從中藥金鐵鎖中提出分離得到的皂苷化合物及其制備方法與在免疫佐劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，第二代疫苗多以純化重組蛋白、合成肽抗原和質(zhì)粒DNA 抗原為主，以替代第一代疫苗活的弱病毒抗原產(chǎn)生的安全隱患。然而純化抗原通常免疫原性較弱，為了克服這一弱點(diǎn)，抗原需要與適當(dāng)?shù)淖魟┫嗷旌稀５?，需要該佐劑有較長的穩(wěn)定期，不易產(chǎn)生降解并易于生產(chǎn)。另外，最重要的是佐劑可以激發(fā)機(jī)體強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫應(yīng)答與抗體生成能力，使機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫保護(hù)能力。由于不同的佐劑需要和不同的抗原進(jìn)行作用，因而疫苗在研究中對(duì)各種類型的感染，就需要有選擇性地促進(jìn)機(jī)體誘導(dǎo)適宜的免疫應(yīng)答。目前，用于人用疫苗的佐劑為鋁鹽佐劑(主要是氫氧化鋁及其磷酸鹽，Alum)。 1擬6年至今，鋁鹽佐劑已成為人用疫苗中經(jīng)常使用的佐劑。但鋁鹽佐劑存在一些問題，主要有(1)因其理化性質(zhì)特點(diǎn)，鋁鹽疫苗冷凍后膠體狀態(tài)被破壞，因此不能冷凍干燥和在低溫狀態(tài)下運(yùn)輸。( 因含鹽量高，貯存日久有結(jié)晶沉淀，而分批制備相同的疫苗也顯得比較困難。( 雖然，鋁是否與老年性癡呆誘發(fā)相關(guān)尚無定論，但對(duì)人、畜的神經(jīng)系統(tǒng)可能有影響。(4)在注射部位有時(shí)會(huì)發(fā)生局部無菌性膿腫，甚至可以形成肉芽腫，輕度局部反應(yīng)較為常見。(5)以鋁鹽佐劑作疫苗較少，它主要適用于以抗體為保護(hù)性免疫的疫苗。(6)由于主要激活2型T輔助(TM)細(xì)胞和誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，佐劑活性低，因此，一般在如白喉、破傷風(fēng)、乙肝、麻疹等疫苗中使用。(7)鋁鹽佐劑釋放抗原物質(zhì)的速度緩慢，效應(yīng)也比較弱，對(duì)許多抗原都不夠有效，對(duì)抗原的要求比較高。皂苷經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其可以激活哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，故它們的免疫佐劑活性受到了廣泛關(guān)注。皂苷QS-21是最具代表性的物質(zhì)，其研究已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。皂苷QS-21是南美皂樹樹皮提取物皂樹皮皂苷(Quil A)的主要成分，研究表明其產(chǎn)生抗體應(yīng)答持續(xù)保護(hù)時(shí)間要比鋁鹽佐劑長，因此可以作為鋁鹽佐劑替代物。但是，Quil A存在嚴(yán)重的毒性，對(duì)小鼠的致死量在100-125 μ g，除此還有嚴(yán)重的溶血性，在注射部位可引起肉芽腫和注射部位癥狀，所以限制了在人用疫苗中的使用。至今，從Quil A中分離得到23種單體化合物。皂苷QS-21對(duì)小鼠的致死劑量是500 μ g，毒性雖小于Quil A，但是它還是僅用于腫瘤疫苗中。 而且，皂苷QS-21等分子結(jié)構(gòu)中存在酯鍵結(jié)構(gòu)影響了其穩(wěn)定性。因而，人們越來越關(guān)注從其它植物中尋找具免疫佐劑活性且毒性相對(duì)較低的皂苷。
權(quán)利要求
1. 一種皂苷化合物，其特征在于，所述化合物包括金鐵鎖皂苷B和金鐵鎖皂苷C，以下列結(jié)構(gòu)式表示
2. 一種如權(quán)利要求1所述皂苷化合物的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟(1)金鐵鎖干燥根，粉碎后80%乙醇加熱回流提取三次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏無醇味，浸膏kg用純水L按1 10的比例稀釋后，過大孔樹脂柱HP-20，分別用純水，70% 乙醇，丙酮依次洗脫；取70 %乙醇洗脫部位為總皂苷，該總皂苷部位過C-18反相鍵合硅膠柱劃段，用純水，30%乙醇，70%乙醇，90%乙醇依次洗脫，共分為四個(gè)洗脫部分S1-S4 ；取 S4段過硅膠柱，以甲醇-乙酸乙酯1 1洗脫分為3部分S6-1，S6-2和S6-3，按照薄層板上斑點(diǎn)的Rf值對(duì)斑點(diǎn)依次收集劃斷，薄層板色譜展開劑為甲醇-乙酸乙酯1 1體積比， 20%硫酸顯色顯色劑；取S6-2部分經(jīng)過C-18反相鍵合硅膠柱，依次用40%，60%，80%和純甲醇洗脫，得到4個(gè)洗脫部分S6-2-a，S6-2-b，S6_2_c和S6-2_d，按照薄層板上斑點(diǎn)的 Rf值依次收集劃斷，薄層板色譜展開劑為甲醇水1 1體積比，20%硫酸顯色顯色劑；取 S6-2-C過凝膠柱，用甲醇作流動(dòng)相洗脫，最后分離到1個(gè)化合物金鐵鎖皂苷A，其化學(xué)結(jié)構(gòu)以下式表不
3.—種如權(quán)利要求1所述皂苷化合物在制備免疫佐劑中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，所述皂苷化合物為金鐵鎖皂苷B或金鐵鎖皂苷C。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，所述免疫佐劑是由金鐵鎖皂苷B作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，所述免疫佐劑是由或金鐵鎖皂苷C作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述應(yīng)用，其特征在于，所述免疫佐劑中，皂苷化合物的量為 5 μ g-1000 μ g/ 單劑量。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，所述免疫佐劑中，皂苷化合物的量為 10-50 μ g/單劑量。
全文摘要
本發(fā)明提供一種皂苷化合物，包括金鐵鎖皂苷B和金鐵鎖皂苷C，從中藥金鐵鎖中提取分離得到。本發(fā)明的皂苷化合物可誘導(dǎo)機(jī)體同時(shí)產(chǎn)生Th1型和Th2型免疫應(yīng)答，且顯示出比鋁膠佐劑能誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)疫苗產(chǎn)生更強(qiáng)的細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，因此，可以作為多種疫苗的免疫佐劑，達(dá)到較強(qiáng)的免疫效果。本發(fā)明提供的皂苷化合物溶血性小和安全性好，制備方法簡便、質(zhì)量容易控制、使用方便、可冷凍保存，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。金鐵鎖皂苷B金鐵鎖皂苷C
文檔編號(hào)A61P37/04GK102382154SQ20111026703
公開日2012年3月21日 申請日期2011年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月9日
發(fā)明者俞飚, 單磊, 孫建松, 張衛(wèi)東, 曹文杰, 沈云亨, 田均勉, 蘇娟 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué), 中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所