專利名稱：一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，及其制備方法，屬于動(dòng)物用疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
新城疫(Newcastle disease, ND)也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的一種禽類急性、高度接觸性、致死性傳染病廣泛流行于世界許多國(guó)家，主要特征是呼吸困難，下痢、神經(jīng)紊亂，黏膜和漿膜出血，嚴(yán)重危害世界養(yǎng)禽業(yè)，被世界衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病。雞新城疫活疫苗一般是通過(guò)把雞ND疫苗毒接種9-11日齡雞胚，經(jīng)過(guò)4-5天的繼續(xù)孵化，擴(kuò)增病毒，然后收取含有大量雞新城疫疫苗毒的尿囊液冷凍干燥而成。其成本相對(duì)較小，適合大規(guī)模推廣使用。這類疫苗常能有效的刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，全面快速的激發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫，給易感雞提供更全面的疫苗保護(hù)。疫苗毒還可從免疫雞傳給未免疫的雞，使其獲得部分免疫力。其使用方便，可作為群體免疫(飲水免疫、氣霧免疫)使用。但活疫苗的缺點(diǎn)主要表現(xiàn)在運(yùn)輸、保存、使用時(shí)要求的條件較高。而冷凍干燥技術(shù)是生物學(xué)的一個(gè)重要應(yīng)用技術(shù)，常用于生物制品的科研和生產(chǎn)中，以保持菌、毒種的生物學(xué)特性，穩(wěn)定生物原料和半成品的生物活性，延長(zhǎng)成品的有效期。凍干保護(hù)劑是活疫苗生產(chǎn)中的關(guān)鍵技術(shù)，對(duì)于疫苗的保存、運(yùn)輸和使用具有很大的影響。國(guó)外活疫苗凍干制品在2 8°C的保存期為15個(gè)月以上，但保護(hù)劑配方是嚴(yán)格保密的，在我國(guó)動(dòng)物用疫苗中，活的凍干疫苗占相當(dāng)大的比例，國(guó)內(nèi)常用的保護(hù)劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡(jiǎn)單，對(duì)疫苗的保護(hù)功能差。如果在2°C 8°C條件下，保存期只有4 6月，多需要在_15°C以下保存。加上國(guó)內(nèi)傳統(tǒng)的生物制品保護(hù)劑的研制相對(duì)滯后，使成品的長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸受限。所以，耐熱凍干保護(hù)劑的研究是非常急需的，在20世紀(jì)80年代，發(fā)達(dá)國(guó)家就已開(kāi)始進(jìn)行耐熱凍干保護(hù)劑的研究。我國(guó)在耐熱凍干保護(hù)劑方面的研究起步較晚，加上中國(guó)市場(chǎng)巨大，國(guó)外生物制品涌入，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)加劇。為了本國(guó)生物制品業(yè)的生存和發(fā)展，新型有效的耐熱凍干保護(hù)劑的研究和應(yīng)用顯得尤為迫切。羧甲基纖維素鈉鈉(CMC)通常用作膠體和粘結(jié)劑，可作為安全的食品添加劑。上世紀(jì)七十年代我國(guó)開(kāi)始采用，九十年代開(kāi)始普遍使用。是當(dāng)今世界上使用范圍最廣、用量最大的纖維素種類。CMC在食品應(yīng)用中不僅是良好的乳化穩(wěn)定劑、增稠劑，而且具有優(yōu)異的凍結(jié)、熔化穩(wěn)定性，特別是對(duì)動(dòng)、植物油、蛋白質(zhì)與水溶液的乳化性能極為優(yōu)異，能使其形成性能穩(wěn)定的勻質(zhì)乳狀液。在醫(yī)藥工業(yè)中可作針劑的乳化穩(wěn)定劑，片劑的粘結(jié)劑和成膜劑。有人經(jīng)基礎(chǔ)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明CMC是安全可靠的抗癌藥載體。低聚木糖又稱木寡糖由2-7個(gè)木糖分子以￠-1, 4糖苷鍵結(jié)合而成的功能性聚合糖。酸、熱穩(wěn)定性好，難發(fā)酵，與其他低聚糖相比，低聚木糖的突出特點(diǎn)是穩(wěn)定性非常好。即使在酸性條件下(PH=2. 5-7)加熱至100°C也基本不分解，根據(jù)文獻(xiàn)，低聚木糖中的木三糖、木二糖和木糖都有還原性，木四糖以上沒(méi)有。亞硒酸鈉研究表明，硒顯著地影響免疫系統(tǒng)所包含的全部三種調(diào)節(jié)機(jī)制，即細(xì)胞免疫、體液免疫和非特異免疫。硒還能促進(jìn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體，使血液免疫球蛋白水平增高或維持正常，因此臨床中給腫瘤患者適量補(bǔ)硒，可有效提高患者機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體防癌和抗癌能力。硒作為谷胱甘肽過(guò)氧化酶的成分，具有抗氧化作用；調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤作用。硒具有抗氧化作用，參與輔酶Qio的合成，保持細(xì)胞膜完整性，維持動(dòng)物肌體的正常生長(zhǎng)發(fā)育，缺硒可引發(fā)多種疾病和癌癥。硒是人體免疫調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)素，既能激活細(xì)胞免疫中淋巴細(xì)胞，又能刺激免疫球蛋白及抗體產(chǎn)生。免疫調(diào)節(jié)作用是通過(guò)抗氧化劑輔酶Q、半胱氨酸、維生素E來(lái)完成，而這些都要在硒的參與下才能激活，缺硒必然導(dǎo)致免疫力下降，各類疾病相 繼出現(xiàn)。硒不但能維持動(dòng)物體正常的生長(zhǎng)發(fā)育，與機(jī)體抗氧化機(jī)制密切相關(guān)，還能提高動(dòng)物的體液免疫和細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)傳染性疾病的抵抗能力，是加強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)和抗感染能力必不可少的微量元素之一。補(bǔ)硒能增強(qiáng)體液免疫。給動(dòng)物補(bǔ)硒能夠提高羊紅細(xì)胞抗原，還能提高免疫球蛋白(IgM、IgA)的含量。雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的研究，?，F(xiàn)用5%蔗糖脫脂奶為保護(hù)劑的凍干疫苗，在2°C 8°C保存僅12個(gè)月，加耐熱凍干保護(hù)劑疫苗，在2°C 8°C可保存2年后。說(shuō)明耐熱凍干保護(hù)劑比常規(guī)的保護(hù)劑更能有效地保護(hù)疫苗，保存時(shí)間更長(zhǎng)久。耐熱凍干保護(hù)劑的種類和配比是影響疫苗的質(zhì)量和保存效果的重要因素。凍干保護(hù)劑可影響生物制品的質(zhì)量、效價(jià)和穩(wěn)定性，改變生物制品的生產(chǎn)工藝，提高產(chǎn)品預(yù)測(cè)能力并增大產(chǎn)品批次間的穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，目的是將疫苗耐熱凍干保護(hù)劑與活疫苗混合，解決雞新城疫活疫苗僅不能在2°C 8°C下長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸?shù)募夹g(shù)問(wèn)題。本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下
一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，具體成分包括羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖2 8 %、山梨醇I 3 %、聚乙烯吡咯烷酮I 3 %、谷氨酰胺0. 5 0. 8 %、亞硒酸鈉0. I 0. 5 %，余量為注射用水。上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的配制方法包括如下步驟
1)將羧甲基纖維素鈉充分溶于注射用水作為A液；
2)將低聚木糖、山梨醇充分溶于注射用水，作為B液；
3)聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺、亞硒酸鈉充分溶于注射用水，作為C液；
4)將上述A液、B液和C液，按I:1 :1的體積比配制成耐熱凍干保護(hù)劑。上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的應(yīng)用，將疫苗凍干保護(hù)劑按3 5 : I的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合，然后經(jīng)分裝后進(jìn)行冷凍干燥。本發(fā)明的保護(hù)劑保護(hù)的疫苗在2 8 °C保存2 4 3 6個(gè)月，仍保持凍干后的外形，病毒含量均超過(guò)國(guó)家獸醫(yī)生物制品規(guī)程的標(biāo)準(zhǔn)。凍干前后病毒損失率低，凍干產(chǎn)品耐老化程度高，產(chǎn)品在2 8 °C保存2 4 3 6個(gè)月，病毒含量不發(fā)生改變，從而解決了雞新城疫活疫苗僅不能在2°C 8°C下長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸?shù)募夹g(shù)問(wèn)題。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
雞新城疫活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度5% (本發(fā)明所涉及的濃度除有特殊說(shuō)明外，皆為質(zhì)量百分比濃度)的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度12%，山梨醇 濃度3 %。3)將聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺，亞硒酸鈉，與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮3 %，谷氨酰胺濃度1.5%，亞硒酸鈉濃度1.5%。4)將A液、B液和C液，按I :1 1的體積比配制成疫苗凍干保護(hù)劑。5)將疫苗凍干保護(hù)劑按3:1與雞新城疫活疫苗病毒液混合。6)分裝后進(jìn)行冷凍干燥。7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存34個(gè)月。實(shí)施例2
雞新城疫活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度3 %的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度6 %，山梨醇濃度9 %。3)將聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺，亞硒酸鈉，與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮3 %，谷氨酰胺濃度1.5%，亞硒酸鈉濃度0.3%。4)將A液、B液和C液，按I :1 1的體積比配制成疫苗凍干保護(hù)劑。5)將疫苗凍干保護(hù)劑按4:1的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合。6)分裝后進(jìn)行冷凍干燥。7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存31個(gè)月。實(shí)施例3
雞新城疫活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度6 %的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度10%，山梨醇濃度3 %。3)將聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺，亞硒酸鈉，與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮3 %，谷氨酰胺濃度2.4%，亞硒酸鈉濃度1.2%。4)將A液、B液和C液，按I :1 1的體積比配制成疫苗凍干保護(hù)劑。5)將疫苗凍干保護(hù)劑按5:1的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合。
6)分裝后進(jìn)行冷凍干燥。
7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存3 6個(gè)月。
權(quán)利要求
1.一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，具體成分包括羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖2 8 %、山梨醇I 3 %、聚乙烯吡咯烷酮I 3 %、谷氨酰胺O . 5 0. 8亞硒酸鈉0. I 0. 5 %，余量為水。
2.權(quán)利要求I所述的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的配制方法，包括如下步驟 1)將羧甲基纖維素鈉充分溶于水作為A液； 2)將低聚木糖、山梨醇充分溶于水，作為B液； 3)谷氨酰胺、亞硒酸鈉充分溶于水，作為C液； 4)將上述A液、B液和C液，按I:1 :1配制成耐熱凍干保護(hù)劑。
3.權(quán)利要求I所述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的應(yīng)用，將保護(hù)劑按3 5: I的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合，然后經(jīng)分裝后進(jìn)行冷凍干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法。本發(fā)明的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑,具體成分包括羧甲基纖維素鈉１～２％、低聚木糖２～８％、山梨醇１～３％、聚乙烯吡咯烷酮１～３％、谷氨酰胺０.５～０.８％、亞硒酸鈉0.１～0.５％，余量為注射用水。本發(fā)明的保護(hù)劑解決了雞新城疫活疫苗僅不能在2℃～8℃下長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸?shù)募夹g(shù)問(wèn)題。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102671209SQ20121017306
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者丁兆鵬, 曲寶涵, 楊芬芳, 苑國(guó)春, 郝智慧 申請(qǐng)人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)