專利名稱：淫羊藿苷的醫(yī)藥新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及淫羊藿苷在預防或治療細菌感染所致?lián)p傷及增強抗生素療效的藥物中的應用，具體地涉及淫羊藿苷在預防或治療細菌感染引起的敗血癥、內毒素血癥、內毒素休克及增強抗生素療效中的藥物中的應用。
背景技術：
細菌毒素分為內毒素和外毒素，內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁中類脂多糖體，位于細胞壁的最外層，生物活性十分復雜，對機體作用廣泛，可激活多種炎癥細胞釋放炎性介質，引起炎癥反應，能使臟器發(fā)生嚴重、復雜的病理變化，可引起休克、彌漫性血管凝血(DIC)、成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS)、全身性炎性反應綜合征(SIRS)和多臟器功能失常綜合征(MODS)等。目前在許多疾病過程中，均可出現(xiàn)革蘭氏陰性菌感染，如急性梗阻化膿性膽管炎、急性出血壞死性胰腺炎、大面積燒傷、腸梗阻、肝?；?、肝炎等。且革蘭氏陰性菌感染率逐年上升，故治療革蘭氏陰性菌所至的內毒素血癥對避免許多危重癥的發(fā)生有著重要的臨床意義，從而成為當今醫(yī)學研究的重要課題之一。
淫羊藿苷是從淫羊藿中提取分離的活性成分，文獻報道其具有治療骨質疏松、ED、抗自由基、穩(wěn)定細胞膜及抗肝損傷作用。中國專利公開文本CN1282584A中公開了淫羊藿苷具有預防或治療性功能障礙和血管收縮的作用，但關于淫羊藿苷具有治療或預防細菌毒素感染所致?lián)p傷及增強抗生素療效的藥物中的作用未見報道；鑒于此，本發(fā)明人通過大量的實驗研究，提供了淫羊藿苷在制備治療或預防細菌感染所致?lián)p傷、增強抗生素療效的藥物中的應用。
淫羊藿苷分子式C33H40O15，分子量676.67，熔點225～230℃，化學結構式

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在制備治療或預防細菌感染所致?lián)p傷中的應用。
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在增強抗生素療效的藥物中的應用，本發(fā)明涉及的抗生素是具有抗革蘭氏陰性桿菌的抗生素，可以為β內酰胺類、大環(huán)內酯類、氨基糖苷類或喹諾酮類。
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在預防或治療細菌感染所致?lián)p傷引起的敗血癥內毒素血癥內毒素休克中的應用。
本發(fā)明提供了以淫羊藿苷為活性成分的用于預防或治療細菌感染所致?lián)p傷增強抗生素療效的藥物組合物該藥物組合物可以通過口服、注射途徑給藥可以以片劑丸劑顆粒劑膠囊懸浮液溶液糖漿注射劑的形式存在，注射用制劑優(yōu)選凍干粉針注射用靜脈乳劑本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明所述的淫羊藿苷在用于上述任一用途時，其使用劑量范圍為50～2000mg/天，優(yōu)選劑量范圍為100～500mg/天。
本發(fā)明人通過下列試驗證實了淫羊藿苷在治療或預防細菌感染所致?lián)p傷及增強抗生素療效的藥物中的應用，增強抗生素療效的藥物中的應用試驗例中，本文以阿莫西林作為抗生素的代表進行研究，但不限于此試驗所用的淫羊藿苷按文獻辛鐘成，Euy Kyung Kim，田貞姬，等.淫羊藿苷對陰莖海綿體的松弛效應及其作用機制.科學通報，2001，46(6)485～9中所述方法提取分離制備，含量≥90％。
具體實施例方式制備例1淫羊藿苷注射劑制備稱取1.00g淫羊藿苷，加入20ml正丁醇和30ml的丙二醇使皂苷完全融解，將0.15g鹽酸丁卡因0.02g的枸櫞酸加入到40ml注射用水中，使完全溶解，并將上述水溶液加入到藥物溶液中，混合均勻；以硼砂和硼酸調節(jié)pH值為5.5±1.0；加入0.1％的針用活性炭85℃保溫30分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過濾，0.22um的微孔濾膜過濾；濾液分裝于7ml西林瓶中，每支裝量2ml。或經凍干機凍干制成凍干粉針。
制備例2制備注射用淫羊藿苷乳劑

將淫羊藿苷、豆磷脂、膽固醇用乙醇溶解后加入到精制大豆油中，混合至澄明，并通過旋轉蒸發(fā)或通入氮氣蒸發(fā)除去醇，得到含淫羊藿苷10mg/ml和50mg/ml膽固醇的大豆油溶液。將泊洛沙姆、甘油分散至注射用水中，在高速攪拌條件下，慢慢滴加含有淫羊藿苷的磷脂、膽固醇的油溶液到分散體系中，制成粗乳劑。將所得到的粗乳劑在壓力100Mpa的條件下，通過乳勻機進一步乳化，乳化結束后于115℃，30min滅菌，分裝即得。
實驗例1淫羊藿苷對小鼠內毒素致死的影響試驗1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
內毒素上海第二軍醫(yī)大學微生物教研室，批號020412。
二級昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
地塞米松磷酸鈉注射液天津藥業(yè)漣水有限公司，規(guī)格5mg，批號030825。
2方法與結果小鼠隨機分為空白對照組、地塞米松組、淫羊藿苷400mg/kg組、100mg/kg組、50mg/kg組、20mg/kg組、10mg/kg組，每組20只，雌雄各半。小鼠靜脈注射內毒素20mg/kg后隨即靜脈給藥，空白對照組給予同體積的溶劑。記錄48h內小鼠死亡時間、數(shù)量并計算死亡率。組間進行X2檢驗。
結果顯示靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明顯降低內毒素所致小鼠死亡(與空白對照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表1淫羊藿苷對小鼠內毒素致死的影響(n＝20)

與空白對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01
實驗2淫羊藿苷對內毒素菌液致小鼠死亡的影響2.1材料二級昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
內毒素菌液取Ecoil菌種，置于盛滅菌的蛋白牛肉胨溶液的錐形瓶中，共制備3000mL，37℃恒溫水浴，搖床振搖48小時，取出，3500轉/分離心10分鐘，取沉淀的菌泥，加入NS 50mL，振搖混勻，3500轉/分離心10分鐘，棄去上清液，菌泥加入NS 50mL，細菌破碎儀破碎細菌，每次5分鐘，進行4次，破碎完畢，3500轉/分離心10分鐘，取上清液，即得粗制的內毒素菌液，稀釋備用。
2.2方法與結果小鼠隨機分為空白對照組、地塞米松組、淫羊藿苷400mg/kg組、100mg/kg組、50mg/kg組、20mg/kg組、10mg/kg組，每組20只，雌雄各半。小鼠靜脈注射稀釋的內毒素菌液0.2mL后隨即靜脈給藥，空白對照組給予同體積的溶劑，記錄48h內小鼠死亡時間、數(shù)量并計算死亡率。組間進行X2檢驗。
結果顯示，結果顯示靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明顯降低內毒素菌液所致小鼠死亡(與空白對照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表2淫羊藿苷對內毒素菌液致小鼠死亡的影響(n＝20)

與空白對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01實驗3淫羊藿苷對細菌致小鼠死亡的影響3.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例2制備。
Ecoil菌液取Ecoil菌種，置于盛滅菌的蛋白牛肉胨溶液的錐形瓶中，共制備3000mL，37℃恒溫水浴，搖床振搖48小時，取出，3500轉/分離心10分鐘，取沉淀的菌泥，加入NS50mL，振搖混勻，3500轉/分離心10分鐘，棄去上清液，菌泥加入NS 50mL，即得Ecoil菌液，稀釋備用。
二級昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
3.2方法與結果小鼠隨機分為空白對照組、地塞米松組、淫羊藿苷400mg/kg組、100mg/kg組、50mg/kg組、20mg/kg組、10mg/kg組，每組20只，雌雄各半。小鼠靜脈注射稀釋的Ecoil菌液0.2mL后隨即靜脈給藥，空白對照組給予同體積的溶劑，記錄48h內小鼠死亡時間、數(shù)量并計算死亡率。組間進行X2檢驗。
結果顯示，結果顯示靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明顯降低Ecoil菌液所致小鼠死亡(與空白對照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表3淫羊藿苷對Ecoil菌液致小鼠死亡的影響(n＝20)

與空白對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01實驗4淫羊藿苷對內毒素致大鼠休克的影響4.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例2制備。
PowerLab多導生理記錄儀(澳大利亞ADI-Instrument公司生產)。
壓力傳感器(YP200型，河北高碑店新航機電設備有限公司，規(guī)格50g)。
內毒素上海第二軍醫(yī)大學微生物教研室，批號020412。
Wistar大鼠，雌雄各半，體重230-260g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證SYXK(魯)20030020。
4.2方法與結果大鼠隨機分為空白對照組、地塞米松組、淫羊藿苷50mg/kg組、25mg/kg組，10mg/kg組，每組10只，雌雄各半。動物稱重后以3.5％戊巴比妥鈉1.0ml/kg腹腔麻醉。分離一側頸總動脈，作動脈插管，將動脈插管的另一端連接到裝有三通閥的壓力傳感器上，壓力信號經傳感器輸入PowerLab多導生理記錄儀，記錄正常的血壓，隨即靜脈注射內毒素5mg/kg，10分鐘后靜脈給藥，空白對照組給予同體積的溶劑，觀察給藥后240min內血壓(平均動脈壓)的變化，組間T檢驗。
結果顯示，靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～50mg/kg)在不同的時間內能顯著升高由內毒素所致休克大鼠的血壓(與空白對照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表4淫羊藿苷對內毒素休克大鼠血壓的影響(n＝10)

與空白對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01實驗5淫羊藿苷對內毒素血癥大鼠的影響5.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
內毒素上海第二軍醫(yī)大學微生物教研室，批號020412。
D-半乳糖胺進口分裝，5g/瓶，北京化學試劑公司，批號030412。
鱟試劑試劑盒福建省福州新北生化工業(yè)有限公司，批號040430。
Wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證SYXK(魯)20030020。
5.2方法與結果大鼠隨機分為正常對照組、空白對照組、地塞米松組、淫羊藿苷50mg/kg組、25mg/kg組、10mg/kg組，每組10只，雌雄各半。實驗前大鼠禁食16h，不禁水。實驗時經尾靜脈注射D-半乳糖胺(300mg/kg)，立即經胃內灌注內毒素(20mg/kg)進行造模，隨即靜脈給藥，正常對照組靜脈注射生理鹽水但不造模，空白對照組給予同體積的溶劑，各組分別于給藥24小時后取血以鱟試劑產色基質法測血漿中內毒素水平。組間T檢驗。
結果顯示，靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～50mg/kg)能顯著降低內毒素血癥大鼠血漿中內毒素水平(與空白對照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表5淫羊藿苷對內毒素血癥大鼠血漿中內毒素水平影響(n＝10)

與正常對照組比較，**P＜0.01；與空白對照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01實驗6淫羊藿苷對重度燒傷引起損傷大鼠的影響6.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
鱟試劑試劑盒(福建省福州新北生化工業(yè)有限公司，批號040430)Wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證SYXK(魯)20030020。
6.2方法與結果大鼠隨機分為正常對照組、空白對照組、地塞米松組、淫羊藿苷50mg/kg組、25mg/kg組、10mg/kg組，每組10只，雌雄各半。除正常對照組外，其余各組動物腰部以下肢體去毛，80℃熱水燙傷30s，造成深II度燒傷，制作大鼠重度燒傷休克模型。24小時后取血以鱟試劑產色基質法測血漿中內毒素水平。組間T檢驗。
結果顯示，靜脈給予不同劑量淫羊藿苷(10～50mg/kg)能顯著降低重度燒傷大鼠血漿中內毒素水平(與空白對照組比較，P＜0.05或P＜0.01)。
表6淫羊藿苷對重度燒傷大鼠的血漿中內毒素水平影響(n＝10)

與正常對照組比較，**P＜0.01；與空白對照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01
實驗7淫羊藿苷對抗生素的增效試驗7.1材料淫羊藿苷注射劑按制備例1制備。
Ecoil菌液取Ecoil菌種，置于盛滅菌的蛋白牛肉胨溶液的錐形瓶中，共制備3000mL，37℃恒溫水浴，搖床振搖48小時，取出，3500轉/分離心10分鐘，取沉淀的菌泥，加入NS 50mL，振搖混勻，3500轉/分離心10分鐘，棄去上清液，菌泥加入NS 50mL，即得Ecoil菌液，稀釋備用。
阿莫西林膠囊(齊魯制藥廠，規(guī)格0.25g/粒，批號030412)二級昆明種小鼠，體重19～21g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
7.2方法與結果小鼠隨機分為空白對照組、地塞米松組、阿莫西林15mg/kg組、阿莫西林30mg/kg組、阿莫西林15mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組、阿莫西林30mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組，每組20只，雌雄各半，靜脈注射稀釋的內毒素菌液0.2mL，隨即各組給藥，阿莫西林灌胃給藥，淫羊藿苷靜脈給藥，空白對照組給予同體積的溶劑，記錄48h內小鼠死亡時間、數(shù)量并計算死亡率。組間進行X2檢驗。
結果顯示，阿莫西林15mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組作用強度明顯優(yōu)于阿莫西林15mg/kg組；阿莫西林30mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg組作用強度明顯優(yōu)于阿莫西林30mg/kg組；提示阿莫西林聯(lián)用淫羊藿苷能更加明顯降低由Ecoil菌液所致小鼠死亡率。
表7淫羊藿苷對Ecoil菌液致小鼠死亡的影響(n＝20)

與空白對照組比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與阿莫西林15mg/kg組比較bP＜0.05；與阿莫西林30mg/kg組比較cP＜0.05；與淫羊藿苷組比較dP＜0.05.
權利要求
1.淫羊藿苷在制備治療或預防細菌感染所致?lián)p傷中的應用。
2.淫羊藿苷在預防或治療細菌感染所致?lián)p傷引起的敗血癥、內毒素血癥、內毒素休克中的應用。
3.淫羊藿苷在增強抗生素療效的藥物中的應用。
4.根據(jù)權利要求3所述的應用，抗生素是指具有抗革蘭氏陰性桿菌的抗生素，可以為β內酰胺類、大環(huán)內酯類、氨基糖苷類或喹諾酮類。
5.淫羊藿苷在用于權利要求1-4任一所述用途時，其使用劑量范圍為50～2000mg/天。
6.根據(jù)權利要求5所述的應用，其優(yōu)選劑量范圍為100～500mg/天。
7.以淫羊藿苷為活性成分的用于預防或治療細菌感染所致?lián)p傷、增強抗生素療效的藥物組合物。
8.根據(jù)權利要求5所述的藥物組合物，其可以以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑的形式存在。
9.根據(jù)權利要求6所述的藥物組合物，其優(yōu)選以凍干粉針、注射用靜脈乳劑形式存在。
全文摘要
本發(fā)明提供了淫羊藿苷在制備治療或預防細菌感染所致?lián)p傷中的應用，具體地涉及其在預防或治療細菌感染所致?lián)p傷引起的敗血癥、內毒素血癥、內毒素休克中的應用。本發(fā)明還涉及其在增強抗生素療效的藥物中的應用。
文檔編號A61P31/04GK1803139SQ20051004232
公開日2006年7月19日 申請日期2005年1月10日 優(yōu)先權日2005年1月10日
發(fā)明者田京偉, 孫盛茂, 蔣王林, 徐本明 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司