專利名稱：槐屬苷的抗腫瘤作用及其藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于槐屬苷(Sophoricoside，染料木素-4’-葡萄糖苷)在抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用及其藥物制劑，屬于中藥領(lǐng)域。
槐屬苷(Sophoricoside)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式染料木素-4′-葡萄糖苷(genistein-4′-glucoside) R＝β-D-Glu
本發(fā)明的目的之一是提供了槐屬苷的藥物制劑；本發(fā)明的目的之二是提供了槐屬苷的抗腫瘤新用途。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的藥物制劑含有1％-99％的槐屬苷和99％-1％的賦形劑(包括其它配用的藥物)，優(yōu)選含有30％-80％的槐屬苷和70％-20％的賦形劑(包括其它配用的藥物)，最好含有60％-70％的槐屬苷和40％-30％的賦形劑(包括其它配用的藥物)。
按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的槐屬苷制備成多種臨床藥物劑型作為抗腫瘤藥物，包括口服制或非腸道給藥的劑型。所說(shuō)的口服制劑選于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑中的任何一種；所說(shuō)的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給劑型當(dāng)中的一種。
本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的槐屬苷為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學(xué)藥品。
本發(fā)明的槐屬苷藥物制劑具有抗腫瘤作用，是通過(guò)以下的藥效學(xué)試驗(yàn)得到證實(shí)的。實(shí)驗(yàn)例1槐屬苷對(duì)體外腫瘤細(xì)胞的抑制作用細(xì)胞 人胃低分化粘液腺癌細(xì)胞(MGC-803)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人黑色素瘤細(xì)胞(A375-S2)、人小細(xì)胞肺癌(NCI-H446)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(SWILLC)、人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)、人胃癌細(xì)胞(SGC-7901)、人紅白血病細(xì)胞(K562)、人肝癌細(xì)胞(BEL-7402)、早幼粒白血病細(xì)胞(HL-60)等十一種細(xì)胞系均購(gòu)自長(zhǎng)春腫瘤醫(yī)院。
藥品及試劑槐屬苷(Sophoricoside)由吉林天藥科技股份有限公司天然藥物所中藥化學(xué)室提供，淡黃色粉末狀結(jié)晶；四甲基偶氮唑鹽(MTT)為Sigma公司產(chǎn)品；青霉素G鉀鹽為Sigma公司產(chǎn)品；硫酸鏈霉素Sigma公司產(chǎn)品；HEPES為Sigma公司產(chǎn)品；DMSO為Sigma公司產(chǎn)品；胰酶為Difco公司；新生牛血清(FBS)為北京元亨圣馬生物技術(shù)研究所產(chǎn)品；RPMI-1640培養(yǎng)基為Hyclone公司產(chǎn)品。
儀器CK2TRC-3熒光倒置顯微鏡，日本OLYMPUS產(chǎn)品；D-63450-CO2培養(yǎng)箱，德國(guó)Hera公司產(chǎn)品；FCANF129004酶標(biāo)儀，澳大利亞TECAN公司產(chǎn)品。
實(shí)驗(yàn)方法MTT法 十一種人的腫瘤細(xì)胞株按常規(guī)方法培養(yǎng)傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞以1×105個(gè)/mL濃度接種于96孔板(100μL/孔)，培養(yǎng)12h后，實(shí)驗(yàn)組加入各濃度槐屬苷(或5-FU作為陽(yáng)性對(duì)照組)100μL/孔，陰性對(duì)照組加入培養(yǎng)液100μL/孔，每組各設(shè)4個(gè)平行孔，并分別設(shè)空白孔(即只加入藥液和培養(yǎng)液，不加細(xì)胞)以調(diào)零?；睂佘战M分別培養(yǎng)20、44(由于5-FU是抗代謝抗腫瘤藥物，故培養(yǎng)44h)、68h后，加入5mg/mLMTT 20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入DMSO150μL，混勻，酶標(biāo)儀(λ＝492nm)測(cè)定吸光度(A492)，利用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算細(xì)胞死亡率，求取IC50。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，經(jīng)SPSS軟件統(tǒng)計(jì)，槐屬苷對(duì)A375-S2、SGC-7901、BEL-7402、MCF-7、K562、Hela、MGC-803、NCI-H446、SWILLC、U251、HL-60等十一種腫瘤細(xì)胞均有不同程度的抑制作用，不同濃度槐屬苷對(duì)十一種腫瘤細(xì)胞的抑瘤率、IC50和5-FU對(duì)各細(xì)胞的IC50值詳見(jiàn)表1和2。從表1和表2中可以看出，槐屬苷對(duì)A375-S2、SGC-7901、MCF-7、Hela和MGC-803細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用較強(qiáng)，而對(duì)U251、SWILLC細(xì)胞的敏感性較差，表明槐屬苷對(duì)腫瘤細(xì)胞有一定的選擇性抑制作用。此外，比較槐屬苷和5-FU對(duì)各細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制曲線，從曲線斜率可見(jiàn)5-FU對(duì)細(xì)胞的作用較緩和(即曲線的坡度較小)，而槐屬苷對(duì)細(xì)胞的作用較急劇(即曲線的坡度較大)，槐屬苷和5-FU可能具有不同抗腫瘤的作用機(jī)制。
表1不同濃度的槐屬苷對(duì)十一種腫瘤細(xì)胞的抑瘤率

表2 MTT法測(cè)定槐屬苷和5-FU對(duì)十種腫瘤細(xì)胞的IC50

實(shí)驗(yàn)例2槐屬苷對(duì)實(shí)體腫瘤細(xì)胞的抑制作用動(dòng)物 昆明種小白鼠，動(dòng)物合格證編號(hào)10-1023；C57BL/6純系小鼠，動(dòng)物合格證編號(hào)10-1025。均由白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，體重18-22g，雌雄兼用。
瘤株 S180、Hep·A22、ESC、Lewis均由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所引進(jìn)，中藥所傳代保存瘤株。
藥品 環(huán)磷酰胺，南通第二制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)980301-1。替加氟片(呋喃氟尿嘧啶片)濟(jì)南制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)990412?；睂佘沼杉痔焖幙萍脊煞莨咎烊凰幬镅芯克峁?。
實(shí)驗(yàn)方法 取荷瘤傳代鼠脫頸椎處死，固定于板上。用碘酊及酒精消毒動(dòng)物皮膚切開皮膚，選擇腫瘤生長(zhǎng)良好，無(wú)壞死或液化的瘤組織，按一定比例加入無(wú)菌生理鹽水，用組織勻漿器制成含2500萬(wàn)以上/ml的細(xì)胞懸液，于小鼠腋窩皮下接種0.2ml/只，接種部位皮膚先用碘酊及酒精消毒。每個(gè)瘤株，每次試驗(yàn)接種60只雄性鼠，重復(fù)試驗(yàn)時(shí)改用雌性，接種后次日隨機(jī)分組，每組12只，試驗(yàn)設(shè)高、中、低三個(gè)劑量及試驗(yàn)對(duì)照組和陽(yáng)性藥組，其中高、中、低劑量組分別給予槐屬苷0.8、0.4、0.2g/kg體重，陽(yáng)性藥組按20mg/kg體重給予環(huán)磷酰胺，試驗(yàn)對(duì)照組給相應(yīng)體積的常水。灌胃給藥，每天一次，給藥10天后處死，稱體重，摘瘤稱重，計(jì)算抑瘤率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3-6。
結(jié)果上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明槐屬苷對(duì)小鼠S180、Hep·A22、ESC及Lewis等實(shí)體瘤均有明顯的抑制作用，荷瘤小鼠給藥后，對(duì)體重增長(zhǎng)無(wú)影響，表明該藥無(wú)明顯毒副作用。
表3槐屬苷對(duì)小鼠S180的抑制作用三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動(dòng)物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重實(shí)驗(yàn)次數(shù) 組別 瘤重抑制率(％)(g/kg×天) (只) (g)(g)第 對(duì)照組1226.0±3.4 1.90±0.65一 環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 1122.7±3.6 0.75±0.3360.53***次 槐屬苷 0.8×10 1225.6±3.7 1.02±0.5146.32**試 槐屬苷 0.4×10 1225.8±3.6 1.10±0.4542.11**驗(yàn) 槐屬苷 0.2×10 1225.9±3.2 1.28±0.6232.63*第 對(duì)照組 1226.1±3.9 1.90±0.62二 環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 1223.0±3.7 0.73±0.3061.58***次 槐屬苷 0.8×10 1225.9±3.8 0.96±0.4049.47***試 槐屬苷 0.4×10 1225.6±3.8 1.24±0.4934.74**驗(yàn) 槐屬苷 0.2×10 1226.0±3.4 1.38±0.5427.37*第 對(duì)照組 1225.4±2.9 1.89±0.61三 環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 1222.4±2.7 0.78±0.2858.73***次 槐屬苷 0.8×10 1225.3±3.5 1.08±0.5242.86**試 槐屬苷 0.4×10 1225.0±3.2 1.10±0.44 41.80**驗(yàn) 槐屬苷 0.2×10 1225.1±3.4 1.31±0.58 30.69*注與對(duì)照組比較，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05，以下表同表4 槐屬苷對(duì)小鼠Hep.A22的抑制作用三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動(dòng)物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重 瘤重抑制率實(shí)驗(yàn)次數(shù) 組別 (g/kg×天)(只) (g) (g) (％)第對(duì)照組 1225.1±3.3 1.93±0.58一環(huán)磷酰胺 20mg/kg×101222.5±2.1 0.77±0.26 60.10***次槐屬苷 0.8×10 1224.5±3.5 0.95±0.40 50.78***試槐屬苷 0.4×10 1224.1±3.9 1.26±0.40 34.72**驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 1224.0±3.8 1.43±0.61 25.91第對(duì)照組 1225.0±3.0 1.92±0.61二環(huán)磷酰胺 20mg/kg×101221.9±3.0 0.71±0.31 63.02***次槐屬苷 0.8×10 1224.5±3.0 1.00±0.43 47.92***試槐屬苷 0.4×10 1224.2±3.4 1.15±0.52 40.10**驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 1225.1±4.3 1.40±0.58 27.08*第對(duì)照組 1225.2±4.5 1.95±0.64三環(huán)磷酰胺 20mg/kg×101122.6±3.1 0.75±0.31 61.54***次槐屬苷 0.8×10 1224.0±3.7 0.96±0.50 50.77***試槐屬苷 0.4×10 1225.8±3.1 1.26±0.57 35.38*驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 1225.5±4.2 1.37±0.56 29.74*表5槐屬苷對(duì)小鼠ESC的抑制作用三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動(dòng)物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重 瘤重抑制率實(shí)驗(yàn)次數(shù) 組別(g/kg×天) (只)(g) (g) (％)第對(duì)照組12 24.6±4.0 2.02±0.67一環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 21.7±2.3 0.70±0.22 65.35***次槐屬苷 0.8×10 12 25.3±3.6 1.02±0.45 49.50***試槐屬苷 0.4×10 12 24.8±3.3 1.16±0.50 42.57**驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 12 24.6±3.7 1.43±0.61 29.21*第對(duì)照組12 25.3±3.5 2.11±0.65二環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 11 23.5±3.2 0.85±0.44 59.72***次槐屬苷 0.8×10 11 25.3±2.9 1.02±0.43 51.66***試槐屬苷 0.4×10 12 25.6±3.2 1.19±0.48 43.60**驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 12 26.2±3.0 1.33±0.57 36.97**第對(duì)照組12 25.3±3.1 2.01±0.71三環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 22.4±2.7 0.79±0.34 60.70***次槐屬苷 0.8×10 12 25.0±2.9 1.22±0.66 39.30**試槐屬苷 0.4×10 12 24.9±3.5 1.22±0.51 39.30**驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 12 25.1±3.5 1.44±0.61 28.36*
表6槐屬苷對(duì)C57小鼠Lewis的抑制作用三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動(dòng)物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重 瘤重抑制率實(shí)驗(yàn)次數(shù) 組別 (g/kg×天) (只)(g) (g) (％)第對(duì)照組12 22.4±2.4 1.69±0.54一環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 20.9±2.0 0.58±0.17 65.68***次槐屬苷 0.8×10 10 22.6±2.4 0.74±0.31 56.21***試槐屬苷 0.4×10 11 22.0±2.5 0.86±0.36 49.11***驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 12 22.7±2.1 0.98±0.37 32.01**第對(duì)照組12 22.3±2.0 1.77±0.60二環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 21.6±2.3 0.53±0.13 70.06***次槐屬苷 0.8×10 11 23.1±2.2 0.76±0.28 57.06***試槐屬苷 0.4×10 12 22.3±2.0 0.92±0.38 48.02***驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 11 22.9±2.1 1.05±0.50 40.68**第對(duì)照組12 22.9±2.3 1.65±0.55三環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 22.3±2.0 0.58±0.16 64.85***次槐屬苷 0.8×10 12 22.8±2.1 0.77±0.31 53.33***試槐屬苷 0.4×10 12 22.4±2.1 0.93±0.37 43.64**驗(yàn)槐屬苷 0.2×10 12 22.5±2.0 1.05±0.43 36.36**上述離體試驗(yàn)和整體試驗(yàn)表明，槐屬苷對(duì)離體和整體腫瘤細(xì)胞均具有明顯的抑制作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1片劑的制備槐屬苷1000g，藥用淀粉100g，混合均勻，用適量乙醇作為粘合劑制粒，干燥，經(jīng)整粒機(jī)整粒，壓片，每片0.25g，口服，每次1-2片，每日二次。實(shí)施例2膠囊劑的制備槐屬苷1000g，藥用淀粉100g，混合均勻，用乙醇作用為粘合劑制濕顆粒，干燥，過(guò)120目篩整粒，裝0#膠囊，每粒0.35g，每次口服1-2粒，每日二次。實(shí)施例3滴丸制的制備聚乙二醇4000300g，在水浴上熔化，加入槐屬苷原料200g，攪拌均勻，傾入保溫管中，調(diào)節(jié)恒溫裝置，使藥液在80-90℃下滴入冷卻過(guò)的液體石蠟中(溫度±4℃)，滴完后，將藥丸傾入濾紙上吸干石蠟油，再加入少量滑石粉，混勻，得槐屬苷滴丸10000粒?？诜淮嗡牧?，一日三次，飯后服用。實(shí)施例4注射劑的制備槐屬苷30g，丙二醇40ml，聚乙二醇400100ml，注射用水500ml，混合，水浴加熱30分鐘，加苯甲醇80ml，再用注射用水加至1500ml，在超聲波中處理10分鐘，再在水浴上加熱30分鐘，調(diào)PH值為5.5-6.5，過(guò)濾，灌封，滅菌即得。每支3ml，肌肉注射，一次3ml，一日2次。
權(quán)利要求
1.一種藥物制劑，其特征在于含有治療有效劑量的槐屬苷和一種或多種藥學(xué)上可接受的藥用賦形劑，或可與槐屬苷組方的其它藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于含有1％-99％的槐屬苷和99％-1％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物制劑，其特征在于含有30％-80％的槐屬苷和70％-20％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其特征在于含有60％-70％的槐屬苷和40％-30％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所說(shuō)的藥物是口服制劑或非腸道給藥的劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其特征在于所說(shuō)的口服制劑選自于片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑當(dāng)中的任何一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其特征在于所說(shuō)的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的任何一種。
8.槐屬苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其特征在于所說(shuō)的抗腫瘤是指抑制腫瘤細(xì)胞和實(shí)體瘤的生長(zhǎng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其特征在于所說(shuō)的腫瘤細(xì)胞和實(shí)體瘤分別為腫瘤細(xì)胞是人黑色素瘤細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人乳腺癌細(xì)胞、人紅白血病細(xì)胞、人宮頸癌細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞、人小細(xì)胞肺癌、人結(jié)腸癌細(xì)胞、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和早幼粒白血病細(xì)胞；實(shí)體瘤是肉瘤180、肝癌腹水型、艾氏腹水癌或肺癌。
全文摘要
本發(fā)明公開了從槐角等植物中獲得的槐屬苷(Sophoricoside)在抗腫瘤方面的醫(yī)藥新用途，同時(shí)也公開了以槐屬苷為制藥原料制備成片劑、膠囊劑、滴丸、注射劑等臨床上可接受的藥物制劑。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1437951SQ0310241
公開日2003年8月27日 申請(qǐng)日期2003年1月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月27日
發(fā)明者趙全成, 劉威, 曲文, 赫玉芳 申請(qǐng)人:吉林天藥科技股份有限公司