專利名稱：一種鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途。
背景技術(shù)：
1 ! (Cynomorium songaricum Rupr.)是鎖 1 禾斗(Cynomoriaceae)鎖 1 屬白勺單禾斗單屬單種植物，多寄生于蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺屬(Nitraria L.)植物根部，是全寄生種子植物。中醫(yī)把植物鎖陽的去花序干燥莖用做中藥鎖陽，又名“不老藥”、“金不換” 和“沙漠人參”等。性溫，味甘，歸脾、腎、大腸經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便、養(yǎng)筋之功效，常用于治療腎陽不足、精血虧虛、不孕、腰膝痿弱、腸燥便秘、神經(jīng)衰弱等癥狀。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)鎖陽具有增強(qiáng)人體性功能、增強(qiáng)動物免疫功能、清除自由基、抗氧化及抗衰老、耐缺氧、抗應(yīng)激、抗疲勞、對糖皮質(zhì)激素具有雙向調(diào)節(jié)作用、抗血小板聚集、潤腸通便、抗腫瘤、 抗胃潰瘍作用及抑制艾滋病病毒的增殖等多種藥理作用。鎖陽的主要成分是鎖陽總黃酮、 鎖陽多糖等，鎖陽總黃酮的藥理作用有清除自由基、抗氧化及抗衰老、耐缺氧、抗應(yīng)激、抗疲勞和增強(qiáng)動物免疫功能等。鎖陽性溫味甘，補(bǔ)腎但其性溫而不燥，其效補(bǔ)而不峻，且鎖陽為滋陰補(bǔ)腎，助陽而不傷陰，能平衡陰陽，無論是陽虛還是陰虛皆可用之。臨床有報(bào)道將鎖陽入復(fù)方治療女性更年期綜合征，療效確切，如澀精止遺類中成藥“鎖陽固精丸”，以鎖陽為主藥，臨床驗(yàn)證其可用于治療更年期綜合征。更年期綜合征臨床表現(xiàn)常有月經(jīng)紊亂、烘熱汗出、記憶力減退、眩暈耳鳴、心悸失眠、腰背酸困、皮膚蟻行感、情緒不寧等，多屬于中醫(yī)所講得“熱證”。更年期綜合征(Climacteric Syndrome，CS)，是婦女常見病和多發(fā)病之一。主要是由于卵巢功能逐漸衰退，引起機(jī)體內(nèi)分泌失調(diào)、免疫力低下和植物神經(jīng)紊亂的癥候群，導(dǎo)致全身多個(gè)系統(tǒng)出現(xiàn)功能以及病理病變。卵巢功能衰退是CS的核心病機(jī)和病理基礎(chǔ)。目前中老年女性中更年期綜合癥患病率約為70%，其中約有40%需要治療，已成為嚴(yán)重影響中老年女性生活質(zhì)量的主要疾患之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為婦女更年期綜合征是由于年齡增長、操勞、產(chǎn)育、體弱多病、卵巢切除或放射治療等因素，因雌激素水平過度降低引起下丘腦-垂體-卵巢軸或腎上腺功能紊亂所致的神經(jīng)遞質(zhì)、激素、細(xì)胞因子等失衡是更年期發(fā)病的主要原因。故神經(jīng)內(nèi)分泌免疫與更年期綜合征的關(guān)系最為密切。更年期綜合征患者，卵巢功能衰退，卵巢中的卵泡群明顯減少，雌激素水平明顯降低。內(nèi)分泌平衡狀況發(fā)生變化，可導(dǎo)致下丘腦及植物神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)，特別是因植物神經(jīng)系統(tǒng)功能變化而產(chǎn)生不同程度的臨床癥狀，一般認(rèn)為癥狀的出現(xiàn)與雌激素分泌減少的速度和程度相一致。西醫(yī)常采用激素替代療法(Hormon Replacement Therapy，HRT)，臨床上常用尼爾雌醇、谷維素雙維B片、谷維素注射液、復(fù)方炔雌醇甲羥孕酮膠囊、復(fù)方鹽酸普魯卡因膠囊、 戊酸雌二醇、氯烯雌醚滴丸等，HRT雖有很好的療效，但臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，長期使用雌激素可增加子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌的發(fā)病率。2002年7月，美國國立衛(wèi)生研究院心臟、肺和血液研究所宣布，婦女健康初始行動(WHI)在健康絕經(jīng)后婦女中使用雌激素加孕激素的臨床試驗(yàn)，由于乳腺癌發(fā)病相對風(fēng)險(xiǎn)增加沈％，且并無總體益處予以提前終止。除了生殖系統(tǒng)增殖性病變外，近期所發(fā)現(xiàn)HRT可增加心腦血管危險(xiǎn)性等嚴(yán)重副作用的發(fā)生，更是明顯限制了此法的臨床應(yīng)用。中醫(yī)學(xué)對本病的認(rèn)識已有數(shù)千年的歷史?！端貑枴ど瞎盘煺嬲摗吩弧芭悠咂?，任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也?！迸赃M(jìn)入更年期會發(fā)生一系列的生理、病理變化。腎氣虧虛，天癸將竭，任沖脈衰，月經(jīng)出現(xiàn)紊亂，以至絕經(jīng)。同時(shí)，也出現(xiàn)一系列因腎精虧虛而導(dǎo)致的腎水不足，虛火內(nèi)生的證候。如潮熱、汗出、五心煩熱、失眠多夢、 腰膝酸軟等。從中醫(yī)的觀點(diǎn)來看，“腎氣衰”是其主要內(nèi)因，因此補(bǔ)腎就是治療本病最基本的法則，至今用鎖陽提取物治療更年期綜合癥未見有公開報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途，可有效解決制備治療更年期綜合癥的藥物， 以用于更年期綜合癥的用藥治療的問題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，取鎖陽藥材，粉碎成粉，用乙醇浸泡，回流提取二次，合并提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散(稀釋)提取液，得藥液，調(diào)節(jié)藥液的PH為4. 5，過大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為1 10(樹脂柱徑高比為1 12)， 先用水洗脫，繼用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物， 提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)為彡71%。本發(fā)明方法簡單，易制備，所得鎖陽提取物總黃酮，有效用于治療更年期綜合癥作用的藥物，是鎖陽提取物的新用途，開拓了鎖陽的藥用價(jià)值，是中藥上的創(chuàng)新。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體情況對本發(fā)明的實(shí)施方式作詳細(xì)說明。本發(fā)明在具體實(shí)施時(shí)，取鎖陽藥材，粉碎成粉，加入藥材重量10倍的質(zhì)量濃度為 70%的乙醇(又稱為70%乙醇，以下同)，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，第一次1.5h，第二次lh，合并兩次提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散(稀釋)提取液的濃度為0. 3g/mL ；調(diào)節(jié)藥液的pH為4. 5，過D-101型大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為 1 10(樹脂柱徑高比為1 12)，先用10倍柱體積水洗脫，繼用6倍柱體積10%乙醇洗脫，然后用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物，提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)為彡71%。本發(fā)明提取物總黃酮具有治療更年期綜合癥作用，可有效用于制備治療更年期綜合癥作用的藥物，并經(jīng)試驗(yàn)得到了充分的證明，有關(guān)試驗(yàn)資料如下鎖陽總黃酮對小鼠更年期模型的影響1實(shí)驗(yàn)材料1. 1實(shí)驗(yàn)動物清潔級小鼠，昆明種，雌性，27 30g，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號 1004053。
1.2實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明鎖陽提取物總黃酮(簡稱為鎖陽總黃酮)。更年安膠囊，長春英平藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，成份地黃、熟地黃、澤瀉、麥冬、玄參、 牡丹皮、茯苓、珍珠母、仙茅、五味子、磁石、首烏藤、鉤藤、浮小麥、制何首烏，功能主治滋陰潛陽，除煩安神，用于更年期潮熱汗出，眩暈耳鳴，煩躁失眠，規(guī)格每粒裝0. 3g，用法用量 口服，一次3粒，一日3次，批號2010020104。大豆異黃酮軟膠囊，康樂福(美國)健康事業(yè)投資公司生產(chǎn)，成份每粒含大豆異黃酮50mg、濃縮大豆蛋白粉25mg、維生素D3、乳酸鈣、大豆磷脂、大豆油、乳化劑、明膠、甘油、著色劑，規(guī)格每粒500mg，用法用量口服，一次1粒， 一日2次，批號00683209。1.3實(shí)驗(yàn)試劑水合氯醛，天津市科密歐化學(xué)制劑開發(fā)中心生產(chǎn)，批號20071018 ；甲醛，天津市科密歐化學(xué)制劑有限公司生產(chǎn)，批號20080110 ；氯化鈉注射液，鄭州永和制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號100923033 ；注射用頭孢唑林鈉，珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司中山分公司生產(chǎn)， 批號90801302 ；血清雌二醇放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司生產(chǎn)，批號20100423 ；血清促黃體生成激素放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司生產(chǎn)，批號20100423 ；血清促卵泡生成激素放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司生產(chǎn)，批號20100423。1.4實(shí)驗(yàn)與儀器電子分析天平，奧豪斯(上海)公司生產(chǎn)，型號AR1140/C;高速臺式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)，型號TGL-168 ；小鼠自主活動測試儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)， 型號以-6 ；小鼠避暗儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)，型號BA-200 ；電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)，型號HWS12 ；可調(diào)式移液器，Thermo Scientific ；智能放免γ 測量儀，上海原子核研究所四環(huán)儀器一廠生產(chǎn)，型號Sn-895B。2實(shí)驗(yàn)方法2. 1造模與給藥造模方法取昆明種小鼠84只，雌性，25 ^g，隨機(jī)選出10只為空白組，其他小鼠進(jìn)行造模腹腔注射10%水合氯醛(0. 033mL/10g)麻醉后腹位固定，然后從小鼠背部最末肋骨下，在腋中線和距脊柱外側(cè)約Icm交叉處剪毛，消毒后切開皮膚和背肌約0. 5 lcm， 切口視野中可見一乳白色發(fā)亮的脂肪團(tuán)，卵巢即包埋其中。用小鑷子輕輕夾住脂肪團(tuán)拉出切口外，分離脂肪團(tuán)，即可見到一團(tuán)細(xì)線狀不規(guī)則呈黃紅色的卵巢。剪取時(shí)先將卵巢下輸卵管(包括脂肪)用細(xì)線結(jié)扎，再摘除卵巢，術(shù)后順勢將子宮角放回腹腔中，縫合肌肉及皮膚，同法摘除雙側(cè)卵巢。術(shù)后精心飼養(yǎng)，肌肉注射注射用頭孢唑林鈉(20萬單位/mL，每只 0. ImL)以防感染，連續(xù)3d，每天1次。手術(shù)5d后開始逐只進(jìn)行小鼠陰道涂片檢查，每天1 次，連續(xù)5d，以確定卵巢是否完全切除。涂片呈現(xiàn)動情反應(yīng)的小鼠棄去不用，選擇60只去勢完全的小鼠隨機(jī)均勻分為6組供實(shí)驗(yàn)用，分別為模型組，更年安膠囊組，大豆異黃酮軟膠囊組，高、中、低劑量鎖陽總黃酮組。給藥方法將以下各藥物混懸于蒸餾水中。于手術(shù)后第5天給予相應(yīng)藥物。取高、中、低劑量鎖陽總黃酮:20mg · HiL-1UOmg · mlA—g · mL—1，按 400mg · kg—1、 200mg ^kg-1UOOmg .kg—1灌胃(相當(dāng)于生藥臨床用量的30倍，15倍，7. 5倍)；更年安膠囊33.751^*111171，按6751^*1^-1灌胃(相當(dāng)于臨床用量的15倍)；大豆異黃酮軟膠囊 12. 5mg · πι Λ按250mg · kg—1灌胃(相當(dāng)于臨床用量的15倍)；模型組和空白組給予同體積的蒸餾水，給藥體積為0. 2mL/10g，每天1次，連續(xù)21d。2. 2觀察項(xiàng)目及檢測方法各組小鼠于給藥19天時(shí)測定5min內(nèi)自主活動次數(shù)，于給藥20_21天時(shí)測定小鼠首次進(jìn)入暗室的潛伏期及5min內(nèi)進(jìn)入暗室遭電擊的次數(shù)。于末次灌胃后2h(禁食15小時(shí))，摘眼球取血，分離血清，采用放射免疫法測定血清中E2、LH、FSH的含量；解剖小鼠，摘除胸腺、脾臟、子宮組織，稱量其濕重并計(jì)算臟器指數(shù)(臟器指數(shù)=臟器濕重mg/小鼠體重 g)，然后取腦；將胸腺、脾臟、子宮、腦組織固定于10%甲醛溶液中，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察各組的組織形態(tài)學(xué)變化。2. 2. 1自主活動次數(shù)測試將各組小鼠放入自主活動儀中，先適應(yīng)環(huán)境lmin，然后測定5min內(nèi)自主活動次數(shù)。2. 2. 2避暗法測試將各組小鼠尾部對著進(jìn)入暗室的小口放入測定盒中，進(jìn)行訓(xùn)練，24h后重新測定小鼠首次進(jìn)入暗室的潛伏期及5min內(nèi)進(jìn)入暗室遭電擊的次數(shù)。2. 2. 3雌二醇的測定方法測定原理本實(shí)驗(yàn)采用放射免疫分析方法。先將校準(zhǔn)品或樣品、標(biāo)記物和抗體按程序規(guī)定依次加入試管中，使標(biāo)記和非標(biāo)記抗原與有限量抗體互相競爭結(jié)合，待反應(yīng)平衡后， 加入分離劑，離心沉淀，使游離抗原與抗原抗體復(fù)合物分離，測量沉淀物的放射性強(qiáng)度。隨 E2含量增加，其放射性強(qiáng)度則相應(yīng)降低。藥盒組成1. 125I-E2，溶液，1瓶，直接使用；2. E2抗體，溶液，1瓶，直接使用；3. E2 校準(zhǔn)品，溶液，7 瓶，濃度為 0、5、20、80、320、1280、4000pg/mL ；4.免疫分離劑(第二抗體)，1瓶；5.質(zhì)控血清，溶液，2瓶，含低、高兩個(gè)劑量。操作步驟將圓底聚苯乙烯試管編號(按復(fù)管操作)，按下表程序操作E2RIA操作步驟體積單位μ L
權(quán)利要求
1. 一種鎖陽提取物在制備治療更年期綜合癥藥物中的應(yīng)用，所述的鎖陽提取物是，取鎖陽藥材，粉碎成粉，加入藥材重量10倍的70%乙醇，浸泡半小時(shí)，回流提取兩次，第一次 1.證，第二次lh，合并兩次提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散提取液的濃度為0. 3g/mL,調(diào)節(jié)藥液的pH為4. 5，過D-101型大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為 1 10，先用10倍柱體積水洗脫，繼用6倍柱體積10%乙醇洗脫，然后用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物，提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁計(jì)為>71%。
全文摘要
本發(fā)明涉及鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途，可有效解決制備治療更年期綜合癥的藥物，以用于更年期綜合癥的用藥治療的問題，其解決的技術(shù)方案是，取鎖陽藥材，粉碎成粉，用乙醇浸泡，回流提取二次，合并提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散提取液，得藥液，調(diào)節(jié)藥液的pH為4.5，過大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為1∶10，先用水洗脫，繼用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物，提取物中總黃酮質(zhì)量含量按蘆丁計(jì)為≥71％，本發(fā)明方法簡單，易制備，所得鎖陽提取物總黃酮，有效用于治療更年期綜合癥作用的藥物，是鎖陽提取物的新用途，開拓了鎖陽的藥用價(jià)值，是中藥上的創(chuàng)新。
文檔編號A61K36/185GK102258549SQ20111025314
公開日2011年11月30日 申請日期2011年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月30日
發(fā)明者張穎, 王燦, 苗明三 申請人:河南中醫(yī)學(xué)院