專利名稱：表鬼臼脂素糖苷的磷酸和磺酸酯的制備方法
本申請是中國專利申請第89107533.X號的分案申請。
本發(fā)明涉及在糖上具有不同取代基的4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的制備方法，它們作為抗腫瘤劑的應(yīng)用和含有它們的藥用組合物。
4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷(式Ⅰ)是由天然存在的木酚素、鬼臼脂素(Ⅱ)衍生得到的抗腫瘤劑。它們的合成方法已在美國專利3，524，844
(Keller-Juslen等)中敘述。式(Ⅰ)化合物中，已確定表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅰa)和表鬼臼毒噻吩糖苷(Ⅰb)在臨床上對許多種類腫瘤是有效的，這些腫瘤包括小肺細(xì)胞、卵巢、睪丸、乳房、膀胱、腦、非淋巴細(xì)胞白血病和何杰金氏病。
美國專利4，547，567和4，716，221公開了式(Ⅲ)化合物，
式中X1和X2之一為OH，另一個為氨基、一烷基氨基或二烷基氨基。通常認(rèn)為上述衍生物具有較高的水溶性。
Seligman等(Cancer Chemotherapy Reports Part I，1975，59233-242)報道了鬼臼脂素磷酸酯二鈉鹽(Ⅳ)的制備方法。但是，該磷酸酯不會被前列腺酸磷酸酯酶水解，并且與母體鬼臼脂素相比未顯示毒性降低。
本發(fā)明提供了式(Ⅴ)抗腫瘤化合物，
式中R2為H，R1系選自(C1-10)烷基;(C2-10)鏈烯基;(C5-6)環(huán)烷基;2-呋喃基;2-噻吩基;(C6-10)芳基;(C7-14)芳烷基;和(C8-14)芳鏈烯基，其中每一個芳環(huán)可以是未被取代的，或者用一個或多個選自鹵素、(C1-8)烷基、(C1-8)烷氧基、羥基、硝基和氨基的基團(tuán)取代;或R1和R2各自為(C1-8)烷基;或者R1和R2與它們所連接的碳結(jié)合形成(C5-6)環(huán)烷基;R3和R4系選自O(shè)H、-OSO2R6、-OSO3H及其藥用鹽，-OP(X)(OH)2及其藥用鹽和-OP(X)(OR7)2基團(tuán)，其中R6為氫、(C1-5)烷基、苯基、(C1-5)烷基取代的苯基或苯基(C1-5)烷基;R7為磷酸酯保護(hù)基;X為氧或硫，但必須R3和R4不全是OH;R5為H或酚保護(hù)基。
優(yōu)先選用的實(shí)例是其中R4為OH，R3為上述定義的式Ⅴ化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了式(Ⅵ)化合物及其藥用鹽，
式中R1、R2和R5同上定義;R6為H或其鹽，或?yàn)镽7。
除非另有說明，這里所用的術(shù)語有“磷酸酯”、“磷酸化作用”和有關(guān)術(shù)語，包括“硫代磷酸酯”，“硫代磷酸化作用”等等;“鹵素”和“鹵化物”是指氯、溴和碘;“烷基”是指直鏈和支鏈的碳鏈;符號“-L”表示離去基團(tuán)，如氯化物，這在酯化反應(yīng)中常會遇到。
起始物質(zhì)4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷(Ⅰ)可以按美國專利3，524，844中所述的方法制備。為了有效地使糖部分的羥基衍生，首先需要保護(hù)活性的酚基?？梢詰?yīng)用已知的方法，例如形成醚、醛縮醇或酯的方法保護(hù)式(Ⅰ)的4'-酚基。酚保護(hù)基的選擇不具體地加以限制，可以是本技術(shù)領(lǐng)域已知的常用保護(hù)基。保護(hù)基的選擇、保護(hù)酚基和脫去酚保護(hù)基的方法參見專題文獻(xiàn)，例如“Protective Groups in Organic Chemistry”，J.F.M.Mcomie，ED.，Plenum Press，1973。合適的酚保護(hù)基的實(shí)例有(但不限于這些)叔丁基、芐基、2-四氫吡喃基、2，2，2-三氯乙氧基羰基和芐氧基羰基;優(yōu)先選用芐氧基羰基。
然后，可以用文獻(xiàn)中已知的常規(guī)方法將受保護(hù)的4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷(Ⅰ)糖部分的羥基轉(zhuǎn)變成本發(fā)明的磷酸酯、硫酸酯或磺酸酯。該反應(yīng)通常是非區(qū)位專一的，并生成2″-，3″-和2″-，3″-雙衍生物的混合物，在磷酸化作用的情況下磷酸酯二聚物(式Ⅵ)也同樣生成混合物。用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)(例如柱層析)，可將產(chǎn)品混合物分離成各個獨(dú)立的成分。在反應(yīng)結(jié)果中，反應(yīng)混合物的分離不是關(guān)鍵性的。
磷酸化作用可以通過受保護(hù)的4'-酚(Ⅰ)和磷酰鹵(P(X)(CL)3)反應(yīng)完成，反應(yīng)在惰性有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷或乙腈)中，在酸受體(最好為叔胺堿，例如吡啶或二異丙基乙胺)存在下進(jìn)行。生成的中間體二氯磷酸酯的混合物可在應(yīng)有的位置進(jìn)行水解，得到磷酸單酯;如果在堿(例如碳酸氫鈉等)存在下進(jìn)行水解，則得到相應(yīng)磷酸單酯的鹽。然后脫去4'-酚保護(hù)基，得到本發(fā)明的磷酸酯。
用式R7OH醇(其中R7是磷酸酯保護(hù)基)處理，還可以將中間體二氯磷酸酯轉(zhuǎn)變成磷酸三酯。磷酸酯保護(hù)基包括(但不限于這些)用一個或多個鹵原子有選擇取代的(C1-5)烷基;用一個或多個選自(C1-5)烷基、鹵素和硝基有選擇取代的苯基;苯基(C1-5)烷基，其中苯環(huán)按以上所述有選擇地取代。在惰性有機(jī)溶劑中，在酸受體存在下使4'-酚受保護(hù)的(Ⅰ)和式(R7O)2P(X)-L化合物反應(yīng)，也可以得到磷酸三酯。可以有選擇地脫去磷酸三酯上的R7基團(tuán)，得到磷酸單酯，將該磷酸單酯與堿(例如碳酸氫鈉)反應(yīng)，可以容易地使其轉(zhuǎn)變?yōu)樗幱名}。因此，磷酸三酯上的R7基團(tuán)可以這樣選擇，以致于它可以和酚保護(hù)基同時脫去，或它可以有選擇地脫去而不影響其它基團(tuán)。
于室溫下，使受保護(hù)的4'-酚(Ⅰ)與三氧化硫或其復(fù)合物(如三氧化硫-吡啶復(fù)合物)在惰性有機(jī)溶劑中反應(yīng)，可以制得本發(fā)明的硫酸酯。應(yīng)用本技術(shù)領(lǐng)域熟知的常用方法脫去酚基，得到產(chǎn)物。使硫酸酯衍生物與所需要的陽離子反應(yīng)，可以容易地將硫酸酯衍生物轉(zhuǎn)變成它的藥用鹽。
將受保護(hù)的4'-酚(Ⅰ)與式R6SO2-L化合物反應(yīng)，同樣可以得到本發(fā)明的磺酸酯。反應(yīng)是在惰性有機(jī)溶劑中、于酸受體存在下、在室溫至約-20℃下完成的。脫去酚保護(hù)基，得到最終產(chǎn)物。
當(dāng)然，合成本發(fā)明化合物不限制于以上概述的方法和試劑，還可以包括能夠在4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的糖部分引入磷酸酯和磺酸酯基的其它方法。當(dāng)然，反應(yīng)條件將隨選用的起始物質(zhì)而改變，并且反應(yīng)條件可以由有經(jīng)驗(yàn)的熟練技術(shù)人員確定。
本發(fā)明的化合物可用于抑制哺乳動物(包括人)的惡性腫瘤的生長。一些化合物，尤其是磷酸酯和硫酸酯，可以看作為4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的前體藥物，在體內(nèi)通過宿主內(nèi)原的因素或外原提供的因素使它們轉(zhuǎn)變成有效的母體藥物。上述前體藥物可以單獨(dú)服用，也可以與能在體內(nèi)釋放有效成分的試劑(例如能使磷酸酯或硫酸酯基團(tuán)裂解的酶)并用。合適的酶的實(shí)例有磷酸酯酶(例如堿性磷酸酯酶)和硫酸酯酶(例如芳基硫酸酯酶)。上述酶可以連結(jié)到腫瘤特定的抗體上，形成酶-抗體共軛物，于是在服用前體藥物之前、在服用前體藥物的同時或在服用前體藥物之后將該酶-抗體共軛物引入到帶有腫瘤的宿主中。在服用本發(fā)明的硫酸酯前體藥物中，前體藥物加上抗體-酶共軛物是優(yōu)先選用的方式?？贵w-酶共軛物、它們的制備和應(yīng)用方法已分別在我們的共同未決專利申請211，301(申請日期1988年6月29日)以及它的原申請及在先主要的原申請[161，068(申請日期1988年2月26日)，081，382(申請日期1987年8月4日)]中詳細(xì)地公開。上述申請做為本申請的參考文獻(xiàn)。
評價本發(fā)明具有代表性的化合物對鼠移植的P388白血病的抗腫瘤活性。給五周齡的雌性CDF小白鼠腹膜內(nèi)注射含有106淋巴白血病P388細(xì)胞。每天單次劑量經(jīng)腹膜內(nèi)注射受試化合物，觀察動物45天。測定處理組動物與未處理的對照組動物平均存活時間(MST)之比增加的百分率，并以%T/C表示。%T/C值為125或125以上的化合物被認(rèn)為是有顯著的抗腫瘤作用。表Ⅰ顯示體內(nèi)評價的結(jié)果;表Ⅰ只給出了最大的%T/C和具有最大效果的劑量。
表Ⅰ 對P388白血病的抗腫瘤作用化合物 劑量(mg/kg/天) MST的% T/C表鬼臼毒吡喃葡糖甙 120 250Ⅺ 120 185Ⅻ 30 120ⅩⅢ 30 125ⅩⅦ 60 195ⅩⅧ 30 115ⅩⅨ 30 100ⅩⅩⅢ 120 175ⅩⅩⅣ 60 130ⅩⅩⅥ 30 130ⅩⅩⅦ 120 105ⅩⅩⅧ 10 105用B16黑素瘤細(xì)胞研究本發(fā)明化合物的細(xì)胞毒性。在補(bǔ)充胎牛血清(10%)和卡那霉素(60mcg/ml)的伊格爾基本必需培養(yǎng)液中使B16黑素瘤細(xì)胞生長到對數(shù)生長期。收集腫瘤細(xì)胞并移植到帶有試驗(yàn)物質(zhì)的96孔微量滴定板內(nèi)，接種物數(shù)量為3.0×104細(xì)胞/ml。在5%CO2和95%空氣的濕潤大氣壓下保溫72小時。用中性紅使細(xì)胞染色后，于540nm處用比色法測定對上述細(xì)胞系的細(xì)胞毒作用，并記錄抑制50%細(xì)胞生長的濃度(IC50)。IC50值高于100μg/ml一般認(rèn)為沒有細(xì)胞毒作用。
表Ⅱ 在體外對B16黑素瘤的細(xì)胞毒性化合物 IC50(ug/ml)表鬼臼素吡喃葡糖甙 0.21Ⅺ 2.2Ⅻ 20ⅩⅢ 37ⅩⅦ 0.07ⅩⅧ 5.4ⅩⅨ 30ⅩⅩⅢ 0.32ⅩⅩⅣ 29ⅩⅩⅥ 8.0本發(fā)明提供了抑制黑素瘤腫瘤的方法，該方法包括給帶有腫瘤的宿主服用抑制腫瘤有效劑量的式Ⅴ或Ⅵ抗腫瘤化合物。為此，可以通過普通的途徑(例如靜脈、肌內(nèi)、瘤內(nèi)、動脈內(nèi)、淋巴內(nèi)或經(jīng)口)給藥，但是也不僅限于這些途徑。在某些情況下，藥物可以與在體內(nèi)能夠使藥物活化的抗體-酶共軛物一起服用。
另一方面，本發(fā)明還提供了包括式Ⅴ或Ⅵ化合物及藥用載體的藥用組合物?？梢詫⒖鼓[瘤組合物制成適用于所需給藥途徑的制劑形式。所述組合物的實(shí)例包括用于口服的固體組合物，其制劑有例如片劑、膠囊劑、小丸劑、粉劑和顆粒劑;適用于口服的液體組合物，其制劑有例如溶液劑、懸浮劑、糖漿劑和馳劑，以及適用于非經(jīng)腸道給藥的制劑，例如無菌溶液劑、懸浮劑或乳劑。也可以將它們制成無菌固體組合物的形式，在應(yīng)用前將該無菌固體組合物直接溶于滅菌水、生理鹽水或其它無菌可注射的介質(zhì)中。
給予哺乳動物宿主的最佳劑量和方式可以由熟習(xí)本技術(shù)領(lǐng)域的工作人員容易地確定。當(dāng)然，應(yīng)該懂得，使用的實(shí)際劑量將根據(jù)具體配制的組合物、應(yīng)用的具體化合物、應(yīng)用的方式和具體的部位、需治療的宿主和疾病的情況而改變。要考慮到能改變藥物作用的許多因素，這些因素包括年齡、體重、性別、飲食、服藥時間、給藥途徑、排泄速度、患者的狀況、藥物配方、反應(yīng)敏感性以及疾病的嚴(yán)重程度。
下述實(shí)施例只是為了詳細(xì)敘述本發(fā)明，不應(yīng)將其解釋為對本發(fā)明范圍的限制，本發(fā)明的范圍由附在本申請后的權(quán)利要求書單獨(dú)地限定。
實(shí)施例1a.4'-O-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅶ)的制備在30分鐘內(nèi)將氯甲酸芐酯(1.98ml，15mmol)加到由表鬼臼毒吡喃葡糖甙(5.88g，10mmol)、吡啶(10ml)以及二氯甲烷(100ml)組成的混合物中，溫度保持在-15℃?；旌衔镌?15℃另外攪拌1小時，依次用5%鹽酸、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑得到8.05g粗產(chǎn)物，再經(jīng)硅膠柱(5%甲醇-二氯甲烷)純化，得6.93g(96%)的4'-O-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙，為無色半固體狀物。
熔點(diǎn)152-155℃IR γmax(液體石蠟)cm-13200-3600(OH)，1760(內(nèi)酯和4'-O-芐氧基羰基)，1600(芳族的)。
1H NMR(60MHz，CDCl3)δ7.36(5H，s，OCO2CH2Ph)，6.81(1H，s，5-H)，6.50(1H，s，8-H)，6.25(2H，s，2′-and 6′-H)，5.94(2H，br.s，O-CH2-O)，5.23(2H，s，-OCO2CH2Ph)，4.89(1H，d，J＝4Hz，4-H)，3.66(6H，s，3′，5′-OCH3)，2.8-3.0(2H，m，2″，3″-OH，D2O交換)，1.38(3H，d，J＝5Hz，7″-CH3).
b.4'-O-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的磷酸化將三氯氧磷(280μl，3mmol)慢慢加到冷至0℃的4'-O-芐氧基羰基表臼毒吡喃葡糖甙(1.511g，2.1mmol)在無水二氯甲烷(10ml)和吡啶(10ml)的溶液中，并將混合物在0℃攪拌45分鐘。然后加入芐醇(620μl，6mmol)，使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝兀瑪嚢?小時后用二氯甲烷(50ml)稀釋，用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。溶劑經(jīng)真空蒸發(fā)，得2.40g粗的半固體產(chǎn)物，其中含有三種成分(硅膠薄層層析Rf0.66，0.54，0.46)，用硅膠層析分離(1%甲醇-二氯甲烷)。合并Rf＝0.66的部分，并經(jīng)真空蒸發(fā)，得到435mg(21%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸二芐基酯(Ⅷ)。同樣Rf＝0.54和0.46的部分分別提供352mg(21%)雙(4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-O-)磷酸芐基酯(Ⅸ)和262mg(13%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸二芐基酯(Ⅹ)。
IR νmax(液體石蠟)cm-1Ⅷ 3300(寬峰)1760，1600Ⅸ 3300(寬峰)1760，1600Ⅹ 3350、1760、1600c.制備3″-和2″-表鬼臼毒吡喃葡糖甙磷酸二鈉和雙(表鬼臼毒吡喃葡糖甙基-3″-)磷酸酯鈉
4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸二芐基酯(270mg)的甲醇(20ml)和乙酸乙酯(20ml)溶液中含有10%鈀碳(50mg)，在1個大氣壓下將該溶液氫化1小時。催化劑經(jīng)過濾除去，濾液在真空下濃縮，得到188mg半固體，將它與乙酸乙酯一起研磨，得到145mg(79%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二氫磷酸酯，為淺棕色粉末狀物。將135mg該產(chǎn)品溶于碳酸氫鈉水溶液中(33.6mg在2ml水中)，并冷凍干燥，得到140mg表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸酯二鈉(化合物Ⅺ)，為灰色粉末。純度測定95%，高效液相色譜法(Lichrosorb RP-18，70%甲醇-水)。
熔點(diǎn)262-263℃(分解)IR νmax(液體石蠟)cm-13377(寬峰)、1762、1615UV λmax(甲醇)nm(ε)238(肩峰)，13，000)，285(4，010)SIMS m/z713(M+H)+根據(jù)上述方法，將97mg 4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸二芐基酯氫化，得到70mg(約100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸酯二鈉(化合物ⅩⅡ)，為灰色粉末狀物。
純度測定95%，高效液相色譜法。
熔點(diǎn)255-257℃(分解)IR νmax(KBr)cm-13460，1772、1615UV λmax nm(ε)240(肩峰，12，600)，
284(3，740)SIMS m/z713(M+H)+，735(M+Na)+。
同樣地，將135mg雙(4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-)磷酸芐基酯氫化，得60mg(58%)雙(表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-)磷酸酯鈉(化合物ⅩⅢ)，為淺灰色粉末狀物。
純度測定95%，高效液相色譜法熔點(diǎn)265-266℃(分解)IR νmax(KBr)cm-13460，1772，1620。
UV λmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，24，600)285(7，730)SIMS m/z1262(M+H)+，1285(M+Na)+。
實(shí)施例2a.4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的甲苯磺酰化于0℃將4'-二甲氨基吡啶(200mg)和甲苯磺酰氯(870mg，4.6mmol)加到4'-芐氧基羰基表鬼臼吡喃葡糖甙(實(shí)施例1步驟a的產(chǎn)品2.2g，3mmol)的無水吡啶(50ml)溶液中，混合物在室溫下攪拌3天。再將分子篩(4A)和另外的甲苯磺酰氯(870mg，4.6mmol)加到混合物中，在室溫下連續(xù)攪拌一個星期。在攪拌一星期后濾去沉淀，濾液用CH2Cl2稀釋，用水、5%鹽酸NaHCO3水溶液和水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，然后在真空下濃縮，得含有三種成分的粗固體(2.35g)(硅膠薄層層析Rf0.8、0.6和0.4)，用硅膠柱層析分離(2%甲醇-CH2Cl2)。將Rf0.8的部分合并，并在真空下蒸發(fā)，得602mg(19%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯(ⅩⅣ)，為無色粉末狀物。同樣，Rf0.6和R 0.4的部分分別得到690mg(26%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(ⅩⅤ)和156mg(6%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯(ⅩⅥ)，為無色粉末狀物，具有吸濕性。
4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯ⅩⅤ熔點(diǎn)145-148℃元素分析，C44H44O17S.3H2O計(jì)算值C56.77，H5.41，S3.44實(shí)測值C56.84，H4.91，S3.904'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯ⅩⅥ熔點(diǎn)135-139℃元素分析C44H44O17S.3H2O計(jì)算值C56.77，H5.41，S3.44實(shí)測值C56.61，H4.89，S3.704'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯(ⅩⅣ)熔點(diǎn)149-152℃b.表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-和2″-甲苯磺酸酯和2″，3″-二甲苯磺酸酯的制備于一個大氣壓和10%鈀碳(40mg)存在下，將4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(47mg，0.05mmol)在乙醇-丙酮(4∶1，2.5ml)中的溶液邊攪拌邊氫化1小時。過濾除去催化劑，濾液在真空中濃縮，得到表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅦ)(42mg，約100%)，為無色粉末狀物，然后在甲醇中重結(jié)晶，得到無色的晶體。
純度測定90%，高效液相色譜法。
熔點(diǎn)175-178℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1780，1600UV λmax(MeoH)nm(ε)245(肩峰，10，260)284(3，900)元素分析，C36H38O15S計(jì)算值C58.21，H5.16，S4.32實(shí)測值C57.80，H5.14，S4.43根據(jù)上述方法，將100mg(0.09mmol)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯氫化，得114mg(約100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅧ)，為無色粉末狀物，在甲醇中重結(jié)晶，得到具有吸濕性的結(jié)晶。
純度測定90%，高效液相色譜法。
熔點(diǎn)210-212℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1780，1600UV λmax(MeoH)nm(ε)243(肩峰，4，560)282(1，450)元素分析，C36H38O15S.H2O計(jì)算值C56.83，H5.30，S4.21實(shí)測值C56.87，H5.37，S4.19同樣，將80mg(0.08mmol)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯氫化，得72mg(約100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-，3″-二甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅨ)，為無色粉末狀物，在甲醇中重結(jié)晶得無色結(jié)晶。
純度測定90%，高效液相色譜法。
熔點(diǎn)169-171℃IR νmax(KBr)cm-13400(寬峰)，1770、1600UV λmax(甲醇)nm(ε)245(肩峰，11，750)284(3，840)實(shí)施例3a.4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的甲磺?；瘜⒓谆酋Ｂ?270μl，2.8mmol)加到4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(1.00g，1.4mmol)的無水吡啶(50ml)溶液中，混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，用水、5%鹽酸、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，然后過濾。濾液經(jīng)真空濃縮得到粗固體(1.4g)，其中含有三種成分(硅膠薄層層析Rf0.51，0.44和0.40)，并用硅膠柱層析分離(1%甲醇-二氯甲烷)。將Rf0.51的部分合并，并在真空中蒸發(fā)，得440mg(36%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲磺酸酯(ⅩⅩ)。同樣，Rf0.44和0.40的部分分別得到314mg(32%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(ⅩⅪ)和248mg(26%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯(ⅩⅩⅡ)，為無色粉末狀物。
4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(ⅩⅪ)溶點(diǎn)167-170℃元素分析C38H40O17S.1/2H2O計(jì)算值C56.36，H4.98，S3.96實(shí)測值C56.23，H5.06，S4.144'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-二甲磺酸酯(ⅩⅩⅡ)熔點(diǎn)159-161℃(吸濕)元素分析C38H40O17S.3H2O計(jì)算值C55.13，H5.11，S3.87實(shí)測值C55.29，H5.00，S4.004'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲磺酸酯熔點(diǎn)226-228℃元素分析，C39H42O19S2.1/2H2O
計(jì)算值C52.76，H4.77，S7.22實(shí)測值C52.78，H4.77，S7.31b.表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-和2″-甲磺酸酯的制備在1個大氣壓和10%鈀碳(30mg)存在下，將4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(60mg，0.07mmol)在乙醇-丙酮(4∶1，2.5ml)中的溶液邊攪拌邊氫化反應(yīng)1小時。濾去催化劑后，濾液在真空下濃縮，得到表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(化合物ⅩⅩⅢ)，為無色粉末狀物。
純度測定90%，高效液相色譜法熔點(diǎn)226-229℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1770，1610UV λmax(甲醇)nm(ε)740(肩峰，12，900)286(3，950)同樣，將30mg(0.04mmol)4″-芐氧基羰基表臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯氫化，得23mg(94%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯(化合物ⅩⅩⅣ)，為無色粉末狀物。
純度測定95%，高效液相色譜法熔點(diǎn)179-181℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1770，1620UV λmax(甲醇)(ε)240(肩峰12，200)285(3，950)
實(shí)施例44'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(350mg，0.5mmol)和二苯膦酰氯(322mg，1.2mmol)的混合物在室溫下攪拌2天，用二氯甲烷(50ml)稀釋，用水、10%鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。溶劑在真空下蒸發(fā)，得4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二苯磷酸酯，為粗的半固體狀物(290mg)。該半固體(190mg)溶液在1個大氣壓和10%鈀碳催化劑存在下邊攪拌邊進(jìn)行氫化反應(yīng)。濾去催化劑后，濾液在真空下濃縮，得到131mg粗的半固體狀物，然后在硅膠柱上進(jìn)行層析(1%甲醇-二氯甲烷)，得59mg(20%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二苯磷酸酯(化合物ⅩⅩⅥ)。
純度測定80%，高效液相色譜法熔點(diǎn)126-130℃IR νmax(液體石蠟)cm-13350，1770，1600FAB MS M/Z 820(M+)實(shí)施例53″-和2″-表鬼臼毒吡喃葡糖甙硫酸酯鈉鹽的制備在氬氣氛下向4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(500mg，0.69mmol)的無水吡啶(20ml)溶液中加入三氧化硫-吡啶復(fù)合物(330mg，2.07mmol)。在室溫下攪拌3小時后，另外再加入三氧化硫-吡啶復(fù)合物(250mg，1.59mmol)，在室溫下攪拌15小時。混合物在真空和40℃以下濃縮，得粗制的油狀物(1.2g)，用硅膠柱層析(2%甲醇-二氯甲烷)，得到2″-和3″-硫酸酯的混合物(411mg)。在1個大氣壓和10%鈀碳(400mg)存在下，將混合物(400mg，0.49mmol)乙醇-丙酮(4∶1，15ml)中的溶液邊攪拌邊進(jìn)行氫化。過濾除去催化劑，濾液在真空下濃縮，得370mg區(qū)位異構(gòu)體的混合物，經(jīng)C-反相柱層析得到52mg(16%)3″-硫酸酯鹽(ⅩⅩⅦ)，107mg(32%)2″-硫酸酯鹽(ⅩⅩⅧ)，以及138mgⅩⅩⅦ和ⅩⅩⅧ的混合物。使3″-硫酸鹽通過DoWex50W(Na+)樹脂，以水為洗脫劑，水溶性部分經(jīng)冷凍干燥，得到化合物ⅩⅩⅦ相應(yīng)的鈉鹽，為無色粉末狀物。同樣，也得到ⅩⅩⅧ的鈉鹽，為無色粉末狀物。
ⅩⅩⅦ熔點(diǎn)223-225℃純度測定90%，高效液相色譜法IR νmax(KBr)cm-13440，1770，1620UV λmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，11，600)284(3，670)SIMS M/Z691(M+H)+，713(M+Na)+ⅩⅩⅧ熔點(diǎn)246-247℃純度測定95%，高效液相色譜法
IR νmax(KBr)cm-13450，1770，1620UV λmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，11，200)285(3，650)SIMS M/Z691(M+H)+，713(M+Na)+實(shí)例1-5中制備的化合物其結(jié)構(gòu)如下
實(shí)施例號化合物 R1R3R4R51a Ⅶ CH3-OH -OH CBZ*1b Ⅷ CH3(BzO)2PO2- -OH CBZ1b Ⅹ CH3OH (BzO)2PO2- CBZ1c Ⅺ CH3(NaO)2PO2- -OH H1c Ⅻ CH3-OH (NaO)2PO2- H2a ⅩⅣ CH3pCH3-C6H4-SO3- pCH3-C6H4-SO3- CBZ2a ⅩⅤ CH3pCH3-C6H4-SO3- OH CBZ2a ⅩⅥ CH3-OH pCH3-C6H4-SO3- CBZ2b ⅩⅦ CH3pCH3-C6H4-SO3- OH H2b ⅩⅧ CH3OH pCH3-C6H4-SO3- H2b ⅩⅨ CH3pCH3-C6H4-SO3- pCH3-C6H4-SO3- H3a ⅩⅩ CH3CH3SO3- CH3SO3- CBZ3a ⅩⅪ CH3CH3SO3- OH CBZ3a ⅩⅩⅤ CH3OH CH3SO3- CBZ3b ⅩⅩⅢ CH3CH3SO3- OH H3b ⅩⅩⅣ CH3OH CH3SO3- H4 ⅩⅩⅤ CH3(PhO)2PO2OH CBZ4 ⅩⅩⅥ CH3(PhO)2PO2OH H5 ⅩⅩⅦ CH3NaSO4- OH H5 ⅩⅩⅧ CH3OH NaSO4- H
*CBZ=芐氧基羰基 Bz=芐基
實(shí)施例化合物 R1R5R81b Ⅸ CH3CBZ Bz1c ⅩⅢ CH3H Na-實(shí)施例6用表鬼臼毒噻吩糖苷代替表鬼臼毒吡喃葡糖甙重復(fù)實(shí)例1-5的一般步驟，得到表鬼臼毒噻吩糖苷化合物Ⅶ-ⅩⅩⅧ的類似物(即R1是2-噻吩基)。
權(quán)利要求
1.制備具有下式的化合物的方法，
其中R8是氫或其藥用鹽，或?yàn)镽7；R2是H，R1系選自(C1-10)烷基和2-噻吩基；R7為芐氧羰基或苯基；R5是氫或芐氧羰基；R3和R4選自O(shè)H，和-OP(X)(OR7)2，并且R3和R4不全是OH基，X為氧和R7為芐氧羰基或苯基；該方法包括下列步驟a.保護(hù)下式化合物的4′-酚基
其中R1和R2的定義同上；b.將步驟a得到的保護(hù)了的4′-酚基化合物與POCl3反應(yīng)，在原位用R7OH醇處理所生成的中間體；c.任意地除去磷酸酯保護(hù)基R7；d.任意地除去4′-酚基保護(hù)基，e.分離異構(gòu)體；和f.任意地將由步驟e得到的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成其藥用鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及在分子中糖的部分有磷酸酯取代基或磺酸酯取代基的4′-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的制備方法。該類化合物具有抗腫瘤作用。
文檔編號A61K31/7042GK1071929SQ9211343
公開日1993年5月12日 申請日期1992年11月25日 優(yōu)先權(quán)日1988年10月31日
發(fā)明者大沼猛, 山崎哲路, 龜井英夫, 內(nèi)藤高幸, 馬克·索爾尼爾 申請人:布里斯托爾-米爾斯公司